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《adma對人臍靜脈內(nèi)皮細胞lox-1表達的影響及pdtc作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、creasedinthegroup，whichtheendothelialcellswastreatedbyPDTCandAD—MAfor24hoursthanthe15iLLmol／1ADMAgroup．100jxmol／LPDTCcande—gradetheexpressionofbothutmostly．Theexpressinofbothwashigherinthe150p．m01／1PDTCgroupthantheIOOwmol／LPDTCgroup．Conclusion1．ADMAcanenhancementASthroughactivatehu
2、manumbilicalveinendo—thelialcellsNF—KB，up—regulatetheexpressionofLOX一1，anddamageen—dothelialfunction．2．SomedensityPDTC．theidio—inhibitorofNF—KB，caninhibitthein-fluenceofADMAOilexpressionofhumanumbilicalveinendothelialcellsNF—KBandLOX一1significantly，andcanprotectandimproveendothelia
3、lcellsduringtheASprocess．Kevwordsatherosclerosis；endothelialeel；endothelialnitricoxidesynthase·5··6·一匾一縮一垂～一、-●．、，’’、；論文{、?一?一一一．一√，ADMA對人臍靜脈內(nèi)皮細胞LOX一1表達的影響及PDTC的作用刖昌內(nèi)皮細胞功能紊亂是動脈粥樣硬化(AS)和高血壓等多種心血管疾病發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)。內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)對NO及O。的生成起重要作用，eNOS的抑制是內(nèi)皮細胞功能紊亂的標(biāo)志?。內(nèi)皮依賴的血管舒張功能的減弱可加速AS病變的發(fā)展，并在血
4、管造影呈現(xiàn)陽性結(jié)果之前被檢測出來口J。導(dǎo)致內(nèi)皮功能紊亂的機制之一即為內(nèi)源性NOS抑制劑的積聚日1。不對稱二甲基精氨酸(ADMA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)源性eNOS競爭性抑制劑，這一抑制劑的血漿水平在患有AS和具有AS危險因素的患者中升高，在這些病人中，血漿ADMA水平與內(nèi)皮功能紊亂和AS的嚴重程度相關(guān)‘“。內(nèi)皮細胞血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體1(LOX一1)主要表達于血管內(nèi)皮細胞，病理條件下特異地結(jié)合、吞噬氧化型低密度脂蛋白(0x—LDL)，并進一步介導(dǎo)OxLDL促進血管內(nèi)皮功能失調(diào)、參與泡沫細胞形成、刺激血管平滑肌細胞增殖及誘導(dǎo)調(diào)亡等多種致AS作用¨1。最
5、近研究發(fā)現(xiàn)ADMA可引起LOX一1表達上調(diào)怕1，亦有研究發(fā)現(xiàn)LOX一1的引物序列中含有核轉(zhuǎn)錄因子NF—KB的結(jié)合位點?，但在ADMA引起LOX一1表達上調(diào)過程中NF—KB的確切作用還未見研究證實。本實驗通過ADMA干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細胞并觀測LOX—l表達的變化，同時應(yīng)用NF—KB的特異抑制劑(PDTC)探討NF—KB在這一過程中可能的調(diào)控作用。材料和方法一、實驗材料1．實驗細胞：人臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV304細胞株，購自武漢大學(xué)中國典·7·型培養(yǎng)物保藏中心。2．主要實驗儀器：(1)日本SANYO公司低溫冰箱(2)TGl6一W5臺式高速離心機(3)DYY一6B型
6、穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(4)722可見分光光度計(5)醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)：OlympusSZXDPl0BX41‘照相系統(tǒng)，MetaMorphImageSystem分析系統(tǒng)3．主要試劑：(1)ADMA粉：美國Sigma試劑公司生產(chǎn)(2)PDTC粉：美國Sigma試劑公司生產(chǎn)(3)LOX一1引物序列：日本Takara公司合成(4)p—aetin引物序列：日本Takara公司合成(5)RT—PCR試劑盒：日本Takara公司(6)NF—KBp65兔抗人多克隆抗體：武漢博士德生物工程有限公司提供(’力其它：RPMll640培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS，Gibco公司)；異硫氰酸胍
7、(Triz01)(上海生工)、溴化乙啶(EB，華美公司)。二、實驗方法(一)細胞培養(yǎng)及分組1．細胞培養(yǎng)：ECV304細胞株，0．25％胰蛋白酶消化傳代，10％胎牛血清的RPMll640培養(yǎng)液，37℃、0．5％c0：孵箱內(nèi)培養(yǎng)。用于實驗前給予無血清的培養(yǎng)基饑餓處理24小時，后加入不同處理因素培養(yǎng)24小時。2．實驗分組：(1)空白對照組(2)ADMA3p,mol／l組(3)ADMA10txmol／1組(4)ADMA15p．．mol／1組(5)ADMA15p．．mol／1+PDTC50p．mol／1組(6)ADMA15ixmol／1+PDTC100p。mol／1組
8、(7)7ADMA15tzmol／1+PDTC150p
