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《缺氧對(duì)體外滋養(yǎng)細(xì)胞及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中巢蛋白表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、缺氧對(duì)體外滋養(yǎng)細(xì)胞及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中巢蛋白表達(dá)的影響InfluenceofhypoxiaonNestinexpressioninvitrotrophoblasticcellsandumbilicalveinendothelialcells作者姓名：唐琳專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：馬曉艷教授學(xué)位類別：醫(yī)學(xué)碩士答辯日期：2015年5月30日中文摘要缺氧對(duì)體外滋養(yǎng)細(xì)胞及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中巢蛋白表達(dá)的影響目的：重度子癇前期（Severepreeclampsia,SPE）被認(rèn)為是一種繼發(fā)于胎盤缺氧的嚴(yán)重妊娠合并癥，表現(xiàn)為妊娠20
2、周后出現(xiàn)高血壓、蛋白尿及多組織功能損傷，嚴(yán)重危脅著母兒的生命與健康。巢蛋白（Nestin）是一種中間絲細(xì)胞骨架蛋白，參與神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育，是傳統(tǒng)觀念的神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Nestin也參與血管的發(fā)生與維護(hù)，是新生血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物之一，其表達(dá)狀況與缺氧環(huán)境有關(guān)。本研究利用缺氧誘導(dǎo)劑建立體外細(xì)胞缺氧環(huán)境，觀察人絨毛膜上皮JEG-3細(xì)胞系和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC）-兩種胚胎干細(xì)胞在不同缺氧時(shí)間和缺氧程度中Nestin的表達(dá)狀況，為胎盤缺氧在
3、SPE發(fā)生、發(fā)展中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料與方法：利用二氯化鈷（CoCl2）模擬體外缺氧環(huán)境，分別誘導(dǎo)JEG-3細(xì)胞系及HUVEC化學(xué)缺氧。提取不同缺氧條件下各組細(xì)胞mRNA,在核酸水平上檢測(cè)細(xì)胞Nestin基因的表達(dá)水平；同時(shí)收集各組細(xì)胞培養(yǎng)基，利用NestinELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1、缺氧對(duì)人絨毛膜上皮JEG-3細(xì)胞系中NestinmRNA及蛋白表I達(dá)的影響1）、JEG-3細(xì)胞系在CoCl2濃度為300umol/L化學(xué)缺氧條件下分別培養(yǎng)6h、12h、24h及
4、48h,后三者NestinmRNA表達(dá)量均明顯高于6h者（P<0.01）。JEG-3細(xì)胞系在CoCl2濃度300umol/L的缺氧環(huán)境中培養(yǎng)24h,與未加入CoCl2的培基中培養(yǎng)24h者比較，NestinmRNA表達(dá)量增加（P<0.05）。隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平逐漸降低，其中6h與48h之間Nestin蛋白水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。JEG-3細(xì)胞系在CoCl2濃度300umol/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h,與未加入CoCl2的培基中培養(yǎng)24h者比較，培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平下降
5、，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。2）、JEG-3細(xì)胞系在CoCl2培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，隨著CoCl2濃度增加，NestinmRNA表達(dá)水平變化不大（P>0.05）；培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。2、缺氧對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞-HUVEC中NestinmRNA及蛋白表達(dá)的影響1）、HUVEC在CoCl2濃度300umol/L化學(xué)缺氧條件下，隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng)，12h、24h及48h者NestinmRNA表達(dá)量均顯著高于6h（P<0.01）。CoCl2濃度300umol/L化學(xué)缺氧24h，與
6、未加入CoCl2化學(xué)缺氧情況者比較，NestinmRNA表達(dá)量增加（P<0.05）。隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng)，HUVEC培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平無(wú)明顯變化（P>0.05）。CoCl2濃度300umol/L化學(xué)缺氧24h，與未加入CoCl2化學(xué)缺氧情況者比較，培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平下降（P>0.05）。2）、HUVEC在CoCl2化學(xué)缺氧條件下培養(yǎng)24h，其濃度在400umol/L時(shí)NestinmRNA表達(dá)量高于200umol/L及600umol/L（P<0.05；P<0.01），CoCl2濃度在600umol/
7、L時(shí)NestinmRNA表達(dá)量II低于200umol/L者（P<0.01）。隨著CoCl2濃度增加，Nestin蛋白濃度無(wú)明顯改變（P>0.05）。結(jié)論1、短時(shí)間慢性缺氧可以促進(jìn)NestinmRNA在滋養(yǎng)細(xì)胞和胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，可能與子癇前期發(fā)病過(guò)程中機(jī)體應(yīng)對(duì)缺氧的保護(hù)性機(jī)制有關(guān)。2、慢性缺氧時(shí)間（一定范圍內(nèi)）延長(zhǎng)是影響Nestin在滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)的不利因素，可能與子癇前期患者胎盤淺著床及血管重塑功能障礙有關(guān)。3、慢性缺氧時(shí)間（一定范圍內(nèi)）延長(zhǎng)對(duì)Nestin在胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞中長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)及其細(xì)胞保護(hù)功能起到
8、支持作用。4、慢性缺氧程度（一定范圍內(nèi)）對(duì)Nestin在滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)影響較弱。慢性缺氧程度稍加重可促進(jìn)NestinmRNA在胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，但缺氧程度明顯加重可能是限制NestinmRNA在胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的不利因素。關(guān)鍵詞：重度子癇前期,巢蛋白,缺氧,滋養(yǎng)細(xì)胞,胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞IIIAbstractInfluenceofhypoxiaonNestinex
