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《缺氧對(duì)體外滋養(yǎng)細(xì)胞及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中巢蛋白表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、缺氧對(duì)體外滋養(yǎng)細(xì)胞及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中巢蛋白表達(dá)的影響InfluenceofhypoxiaonNestinexpressioninvitrotrophoblasticcellsandumbilicalveinendothelialcells作者姓名:唐琳專業(yè):婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師:馬曉艷教授學(xué)位類別:醫(yī)學(xué)碩士答辯日期:2015年5月30日中文摘要缺氧對(duì)體外滋養(yǎng)細(xì)胞及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中巢蛋白表達(dá)的影響目的:重度子癇前期(Severepreeclampsia,SPE)被認(rèn)為是一種繼發(fā)于胎盤缺氧的嚴(yán)重妊娠合并癥,表現(xiàn)為妊娠20
2、周后出現(xiàn)高血壓、蛋白尿及多組織功能損傷,嚴(yán)重危脅著母兒的生命與健康。巢蛋白(Nestin)是一種中間絲細(xì)胞骨架蛋白,參與神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育,是傳統(tǒng)觀念的神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Nestin也參與血管的發(fā)生與維護(hù),是新生血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物之一,其表達(dá)狀況與缺氧環(huán)境有關(guān)。本研究利用缺氧誘導(dǎo)劑建立體外細(xì)胞缺氧環(huán)境,觀察人絨毛膜上皮JEG-3細(xì)胞系和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)-兩種胚胎干細(xì)胞在不同缺氧時(shí)間和缺氧程度中Nestin的表達(dá)狀況,為胎盤缺氧在
3、SPE發(fā)生、發(fā)展中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料與方法:利用二氯化鈷(CoCl2)模擬體外缺氧環(huán)境,分別誘導(dǎo)JEG-3細(xì)胞系及HUVEC化學(xué)缺氧。提取不同缺氧條件下各組細(xì)胞mRNA,在核酸水平上檢測(cè)細(xì)胞Nestin基因的表達(dá)水平;同時(shí)收集各組細(xì)胞培養(yǎng)基,利用NestinELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1、缺氧對(duì)人絨毛膜上皮JEG-3細(xì)胞系中NestinmRNA及蛋白表I達(dá)的影響1)、JEG-3細(xì)胞系在CoCl2濃度為300umol/L化學(xué)缺氧條件下分別培養(yǎng)6h、12h、24h及
4、48h,后三者NestinmRNA表達(dá)量均明顯高于6h者(P<0.01)。JEG-3細(xì)胞系在CoCl2濃度300umol/L的缺氧環(huán)境中培養(yǎng)24h,與未加入CoCl2的培基中培養(yǎng)24h者比較,NestinmRNA表達(dá)量增加(P<0.05)。隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平逐漸降低,其中6h與48h之間Nestin蛋白水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。JEG-3細(xì)胞系在CoCl2濃度300umol/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h,與未加入CoCl2的培基中培養(yǎng)24h者比較,培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平下降
5、,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2)、JEG-3細(xì)胞系在CoCl2培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h,隨著CoCl2濃度增加,NestinmRNA表達(dá)水平變化不大(P>0.05);培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。2、缺氧對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞-HUVEC中NestinmRNA及蛋白表達(dá)的影響1)、HUVEC在CoCl2濃度300umol/L化學(xué)缺氧條件下,隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng),12h、24h及48h者NestinmRNA表達(dá)量均顯著高于6h(P<0.01)。CoCl2濃度300umol/L化學(xué)缺氧24h,與
6、未加入CoCl2化學(xué)缺氧情況者比較,NestinmRNA表達(dá)量增加(P<0.05)。隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng),HUVEC培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平無(wú)明顯變化(P>0.05)。CoCl2濃度300umol/L化學(xué)缺氧24h,與未加入CoCl2化學(xué)缺氧情況者比較,培養(yǎng)基中Nestin蛋白水平下降(P>0.05)。2)、HUVEC在CoCl2化學(xué)缺氧條件下培養(yǎng)24h,其濃度在400umol/L時(shí)NestinmRNA表達(dá)量高于200umol/L及600umol/L(P<0.05;P<0.01),CoCl2濃度在600umol/
7、L時(shí)NestinmRNA表達(dá)量II低于200umol/L者(P<0.01)。隨著CoCl2濃度增加,Nestin蛋白濃度無(wú)明顯改變(P>0.05)。結(jié)論1、短時(shí)間慢性缺氧可以促進(jìn)NestinmRNA在滋養(yǎng)細(xì)胞和胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá),可能與子癇前期發(fā)病過(guò)程中機(jī)體應(yīng)對(duì)缺氧的保護(hù)性機(jī)制有關(guān)。2、慢性缺氧時(shí)間(一定范圍內(nèi))延長(zhǎng)是影響Nestin在滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)的不利因素,可能與子癇前期患者胎盤淺著床及血管重塑功能障礙有關(guān)。3、慢性缺氧時(shí)間(一定范圍內(nèi))延長(zhǎng)對(duì)Nestin在胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞中長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)及其細(xì)胞保護(hù)功能起到
8、支持作用。4、慢性缺氧程度(一定范圍內(nèi))對(duì)Nestin在滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)影響較弱。慢性缺氧程度稍加重可促進(jìn)NestinmRNA在胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá),但缺氧程度明顯加重可能是限制NestinmRNA在胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的不利因素。關(guān)鍵詞:重度子癇前期,巢蛋白,缺氧,滋養(yǎng)細(xì)胞,胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞IIIAbstractInfluenceofhypoxiaonNestinex