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《四妙勇安湯對缺氧人臍靜脈內(nèi)皮細胞的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、四妙勇安湯對缺氧人臍靜脈內(nèi)皮細胞的影響論文.freeliaoyongantangonhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)injuryinducedbyhypoxia.MethodsTheHUVECsalgroup,modelgroupandSimiaoyongantanggroup,andthehypoxiamodeleasuredbyMTTassay.ThetransudationofLDHinthemediumeasuredbybiochemistryandthepos
2、itiveexpressionofVEGFmunofuorescencechemistry.ResultsThelevelofLDHberofthecellsstainedbyVEGFincreasedinthetreatmentgroupofSimiaoyongantang.ConclutionSimiaoyongantanghasprotectiveeffectonhypoxiainjuredHUVECs,ayberelatedtoitseffectofincreasingthecellslivability,red
3、ucingtheinjuryinducedbyhypoxia,up-regulatingexpressionsofVEGFandpromotingangiogenesis.Keyiaoyongantang;hypoxia;humanumbilicalveinendothelialcells;angiogenesis自從Hockel等1提出了“治療性血管生成”的概念后,以促血管生長因子誘導心腦血管組織新生血管形成,已成為治療性血管新生研究中最為活躍的領域。組織缺血缺氧后首先受到影響的是內(nèi)皮細胞,因此,對內(nèi)皮細胞的研究成為了
4、研究缺血缺氧性疾病的重要手段。人臍靜脈為體外獲得內(nèi)皮細胞的重要來源,故選用人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)作為實驗對象?，F(xiàn)代藥理研究表明,四妙勇安湯能夠擴張血管,疏通及促進血液循環(huán),使未閉塞的動脈及側(cè)枝循環(huán)變粗、增多,已經(jīng)廣泛應用于治療血栓閉塞性脈管炎。近年來研究表明,此方對心血管疾患療效確切2。本實驗從細胞活性、乳酸脫氫酶(LDH)漏出量、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)生成量3個方面觀察了四妙勇安湯對缺氧HUVEC的影響。1實驗材料1.1試劑1640干粉(Gibco公司),明膠(Sigma公司),胎牛血清(杭州四季青公司)
5、,100U/mL青霉素、80?g/mL鏈霉素(華北制藥),胰蛋白酶(Amersco公司),四乙酸乙二胺-二鈉(disodiumedetate,EDTA),Earle液(河北醫(yī)科大學),兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原(bs-0332R,北京博奧森生物公司),VEGF(北京博奧森生物公司),異硫氫酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)標記山羊抗兔多克隆IgG(ZF-0311,北京中杉金橋),HUVEC(KG110,南京凱基生物公司),四甲基偶氮唑藍(MTT,Amersco公司),二甲亞砜(DMSO,G
6、ibco公司),磷酸鹽緩沖液(PBS,華瑞創(chuàng)新生物公司),LDH試劑盒(上海豐匯科技公司)。1.2主要儀器CO2培養(yǎng)箱(Thermo),倒置相差顯微鏡(Olympus),熒光顯微鏡(Olympus),微量振蕩器(FUHUAZTT實驗細胞接種于96孔板中,參照上述缺氧模型及實驗分組分別建立96孔板中缺氧模型及進行實驗分組。每組均設8個復孔。將MTT配成終濃度為0.5mg/mL的使用液。棄去96孔板中原培養(yǎng)液,各孔加入MTT使用液100?L,37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育1h。取出培養(yǎng)板倒置,棄去原MTT,加入DMSO100
7、?L,微量振蕩器振蕩15min。用酶標儀在測定波長492nm、參考波長620nm處測定各孔吸光度值4。2.5乳酸脫氫酶漏出量的檢測每組設6個復孔。按試劑盒說明,收集各組細胞培養(yǎng)液2mL,1000r/min離心3min,提取上清液50?L,加入試劑盒自帶試劑3000?L,混勻后置37℃,分別于30、60s時讀取吸光度值。使用前用蒸餾水在340nm處調(diào)零。2.6免疫熒光法測定血管內(nèi)皮生長因子生成量取出6孔板各孔中蓋玻片,PBS輕輕沖洗3次,每次持續(xù)約1min,10%福爾馬林固定液室溫固定10min,PBS輕輕沖洗3次,每次持
8、續(xù)約1min,10%馬血清70?L室溫封閉非特異性抗體20min,加入一抗VEGF(兔抗人,1∶100稀釋)70?L,37℃孵育1h,同時以PBS代替一抗作為對照組。PBS輕輕沖洗3次,每次持續(xù)約1min,加入FITC標記的二抗(羊抗兔IgG,1∶25稀釋)70?L,37℃孵育30min。立即置于熒光顯微鏡下觀察,綠
