大豆苷元對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)與no的關(guān)系研究

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1、大豆苷元對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)與NO的關(guān)系研究作者：鐘星明，于江云，王靜，占敏艷，熊麗嬌，陳喜貴，余星梅，曾靖【摘要】目的觀察大豆苷元（DD）對(duì)異丙腎上腺素（Iso）所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用及其與一氧化氮（NO）的關(guān)系。方法采用Isolmg/（kg·d），背部皮下注射，連續(xù)10d，建立大鼠心肌肥厚模型。造模第2天開(kāi)始給大鼠皮下注射不同濃度的大豆苷元或NS及溶劑，連續(xù)14d，末次給藥后禁食12h，稱重，麻醉后斷頭取血，取心臟稱重后計(jì)算全心重量指數(shù)及左心重量參數(shù)；采用試劑盒測(cè)定血清一氧化氮合酶（NOS）、內(nèi)皮型NOS（eNOS）、誘導(dǎo)型NOS（iNOS）活性及NO含量

2、。結(jié)果與正常對(duì)照組比較，Iso模型組血清NO含量下降，eNOS活性明顯下降，iNOS活性顯著升高；與ISO模型組相比，大豆苷元治療組血清NO含量和eNOS活性顯著升高，iNOS活性下降。結(jié)論大豆苷元對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌肥厚具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制與提高NO含量和eNOS活性、降低iNOS活性有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】大豆苷元；異丙腎上腺素；心肌肥厚；保護(hù)大豆苷元(Daidzin,DD)系葛根中的主要成分之一，葛根的有效成分為大豆苷元、染料木苷、黃豆黃苷、染料木素、黃豆黃素。研究發(fā)現(xiàn)大豆苷元具有抗心律失常、局部麻醉、影響心房肌電生理特性、心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)、Ca2+拮抗、耐缺氧及

3、抗氧化等作用［1～8］。心肌肥厚是以心肌細(xì)胞體積增大和蛋白含量增多為主要特征的代償反應(yīng)，是對(duì)各種心血管刺激因子的適應(yīng)反應(yīng)，但持續(xù)的心肌肥厚會(huì)導(dǎo)致死亡。研究表明，連續(xù)用異丙腎上腺素（Iso）刺激可誘導(dǎo)大鼠心肌肥厚［9］，本實(shí)驗(yàn)利用Iso背部皮下注射構(gòu)造大鼠心肌肥厚模型，研究大豆苷元對(duì)心肌肥厚的保護(hù)作用及其與一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）的關(guān)系。　　1材料與儀器　　1.1藥品和試劑大豆苷元由沈陽(yáng)藥科大學(xué)植化教研室提供，純度為98%；實(shí)驗(yàn)前用二甲基亞砜（DMSO）溶解，使用時(shí)用雙蒸水稀至所需濃度；鹽酸異丙腎上腺素注射針劑（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：H31021344）；NO

4、和NOS分型檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。　　1.2儀器754N可見(jiàn)光分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；賽多利斯BS224S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)?！　?.3動(dòng)物SD大鼠購(gòu)自江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體質(zhì)量220～250g，雄性（動(dòng)物中心許可證號(hào)：2005-0001，動(dòng)物合格證號(hào)：JZDSO)和大豆苷元高劑量（0.3μmol·kg-1）及低劑量（0.1μmol·kg-1）治療組；除正常對(duì)照組外各組分別背部皮下注射Iso1mg·kg-1，正常對(duì)照組同部位注射同體積NS，1次/d，連續(xù)10d，建立心肌肥厚動(dòng)物模型，對(duì)照組和心肌肥厚模型組給同體積的生理

5、鹽水腹腔注射，造模后第2天，各組于皮下注射同體積的NS、溶劑及不同濃度的大豆苷元，1次/d，連續(xù)14d?！　?.4.2心臟重量指數(shù)和左心室重量指數(shù)的測(cè)定末次給藥后禁食12h，稱重后麻醉，取出心臟，去除結(jié)締組織，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干后稱全心重量，剪除心房和右心室，稱左心室重量，計(jì)算心臟重量指數(shù)和左心室重量參數(shù)：心臟重量指數(shù)=全心重(mg)/體重(g),左心室重量指數(shù)=左心室重(mg)／體質(zhì)量(g)?！　?.4.3血清T-NOS、eNOS、iNOS活性和NO含量的測(cè)定大鼠麻醉后，斷頭取血，4℃，2000r/min，離心10min，分離血清，-80℃保存。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明測(cè)定血清T

6、-NOS、iNOS的活性和NO含量，計(jì)算eNOS活性=T-NOS活性-iNOS活性?！　?.4.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Graphpadprism4.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果以柱狀圖表示，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。　　2結(jié)果　　2.1DD對(duì)心肌肥厚大鼠心臟重量指數(shù)和左心室重量指數(shù)的影響Iso模型組大鼠心臟重量指數(shù)及左心室重量指數(shù)值較正常對(duì)照組明顯增加。0.1μmol·kg-1DD組與心肌肥厚模型組比較心臟重量指數(shù)有下降趨勢(shì)，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖1）。0.1μmol/kgDD組與心肌肥厚模型組比較左心室重量指數(shù)下降，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖2）。提示大豆苷元對(duì)異丙腎上腺素致

7、大鼠心肌肥厚有保護(hù)作用?！　?.2DD對(duì)心肌肥厚大鼠血清NO含量的影響與正常對(duì)照組比較，Iso模型組血清NO含量下降，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與Iso模型組相比，低劑量及高劑量DD組血清NO含量均有顯著提高（圖3）?！　?.3DD對(duì)心肌肥厚大鼠血清e(cuò)NOS及iNOS活性的影響與Iso模型組相比，DD低濃度及高濃度組T-NOS活性均有一定下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（數(shù)據(jù)未顯示）；與正常對(duì)照組比較，心肌肥厚模型組表現(xiàn)為血清e(cuò)NOS活性降低，而iNOS活性升高；0.3μmol·kg-1DD組與模