正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選復(fù)方降脂靈的提取工藝

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1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選復(fù)方降脂靈的提取工藝作者：陳紅紅，郭姣，唐春萍，郭彤，何偉【摘要】　　目的優(yōu)選中藥復(fù)方降脂靈的提取工藝。方法采用正交實(shí)驗(yàn)法，以出膏率和提取液中齊墩果酸的含量為指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果復(fù)方降脂靈的最佳提取工藝為加水12倍量，提取3次，2h/次。結(jié)論對(duì)于出膏率，提取次數(shù)有顯著性影響；對(duì)于齊墩果酸，提取次數(shù)、加水量和提取時(shí)間3個(gè)因素均無(wú)顯著性影響?！娟P(guān)鍵詞】復(fù)方降脂靈正交實(shí)驗(yàn)提取工藝齊墩果酸出膏率復(fù)方降脂靈(原名丹七降脂湯)為廣東藥學(xué)院郭姣教授臨床經(jīng)驗(yàn)方，主要由女貞子、白術(shù)、杜仲等8味中藥組成，臨床上在降血脂、降血糖和改善血流變等方面均有良好的作

2、用。其湯劑和粉末膠囊經(jīng)臨床、初步藥效學(xué)研究，均證實(shí)療效確切而無(wú)明顯毒副作用［1］。女貞子是本復(fù)方中的君藥，而齊墩果酸是女貞子的主要藥效成分之一。齊墩果酸除了能用于治療急性黃疸型肝炎、慢性遷延型與活動(dòng)型肝炎和抗癌輔佐藥物外，還具有降糖、降血脂、抗炎、抗病毒、抗衰老及增強(qiáng)免疫的作用［2］。通過(guò)水提取、90％乙醇提取、70％乙醇提取、半仿生提取和綜合提取等不同提取工藝的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明以水提取法的藥效為最好［3］。水提取法工藝簡(jiǎn)單、成本低，而且藥效好。為了研究水提取工藝的最佳條件，用正交實(shí)驗(yàn)法，以出膏率和齊墩果酸含量為考察指標(biāo)，對(duì)水提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)

3、選，為生產(chǎn)提供依據(jù)?！　?材料與儀器　　1.1材料女貞子、杜仲、大薊、白術(shù)、田七等中藥均購(gòu)自廣東省藥材公司，經(jīng)廣東藥學(xué)院生藥學(xué)專家劉基柱老師鑒定為真品?！　?.2儀器與試劑T6紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；HH-6電子恒溫水浴鍋（蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司）；GZX-9420MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）。齊墩果酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；香草醛（指示劑，天津市福晨化學(xué)試劑廠）；薄層層析硅膠H（層析用，青島海洋化工廠）和羧甲基纖維素納鹽（CMC-Na）800－1200為化學(xué)純；其它試劑均為分析純

4、。齊墩果酸對(duì)照品使用液：精密稱定齊墩果酸對(duì)照品10mg，用三氯甲烷配制成濃度為0.2mg/ml的溶液。硅膠板的制備：稱取硅膠H5g，放入研缽中，加入1％CMC-Na溶液適量，調(diào)成糊狀，均勻涂布于潔凈的玻璃板(20cm×4cm)上，使其表面均勻光滑。于室溫下晾干后，置于烘箱內(nèi)加熱活化，在溫度105℃左右保持活化30min，然后放入干燥箱中保存，備用?！　?方法　　2.1工藝設(shè)計(jì)　　采用加熱回流的提取方法，提取時(shí)選擇了加水量、提取時(shí)間及提取次數(shù)3個(gè)因素，每個(gè)因素選取三個(gè)水平設(shè)計(jì)了正交實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1。根據(jù)以上因素水平,選擇L9(3)4正交設(shè)

5、計(jì)表，按照正交實(shí)驗(yàn)表項(xiàng)下的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行提取，用出膏率及齊墩果酸的含量作為考察指標(biāo)，對(duì)水提工藝條件進(jìn)行優(yōu)選?！　?.2樣品溶液的制備藥材經(jīng)60℃恒溫烘30min，稍加搗碎，稱取處方藥材共64g。按正交實(shí)驗(yàn)表項(xiàng)下設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件以加熱回流方式進(jìn)行提取，合并水提取液。將上述提取液濃縮，定容至一定體積，制得樣品溶液。表1提取實(shí)驗(yàn)水平因素（略）　　　2.3出膏率測(cè)定精密量取一定體積樣品溶液，置于已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸發(fā)至近干，再放置烘箱于105℃烘3～4h，置干燥器中冷卻至室溫，精密稱量質(zhì)量，按下式計(jì)算出膏率?！　　〕龈嗦剩?）=W’W×VV’×10

6、0%W′(g)為浸膏質(zhì)量，W(g)為藥材質(zhì)量，V為樣品溶液總體積，V′為量取樣品溶液的體積?！　?.4齊墩果酸的含量測(cè)定　　2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備采用高氯酸－香草醛比色法測(cè)定齊墩果酸的含量［4］。精密量取齊墩果酸對(duì)照品使用液（0.2mg/ml的三氯甲烷溶液）0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mg），分別置于刻度離心管中，水浴揮干溶劑，各精密加入5％香草醛乙酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，混勻，置于70℃恒溫水浴上加熱15min，冷卻至室溫，精密加入醋酸乙酯4ml，搖勻。以試劑為空

7、白，在555nm處測(cè)定吸光度值，結(jié)果見(jiàn)表2。并以吸光度A對(duì)對(duì)照品使用液體積V進(jìn)行直線回歸，得回歸方程A＝0.9425V＋0.0052，r=0.9978。表2標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定數(shù)據(jù)（略）　　　2.4.2樣品測(cè)定精密量取一定體積的樣品溶液，濃縮成稠膏，干燥，稱量質(zhì)量。精密稱取上述膏體10g于圓底燒瓶中，加入三氯甲烷30ml，70℃恒溫水浴回流1h。用分液漏斗分出三氯甲烷層，于殘?jiān)性偌尤肴燃淄?0ml，同樣回流提取1h，合并三氯甲烷溶液，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，揮干溶劑，再用三氯甲烷定容至5.00ml，備用。用精密吸取樣品溶液5μl，對(duì)照品溶液30μl

8、點(diǎn)于同一硅膠板上，用三氯甲烷－甲醇－冰乙酸［5］（40∶1∶1）展開(kāi)10cm，取出，揮干溶劑，再放入飽和碘蒸氣缸中顯色，定