反相高效液相法測定莪術(shù)油凝膠劑中莪術(shù)醇和吉馬酮含量論文

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1、反相高效液相法測定莪術(shù)油凝膠劑中莪術(shù)醇和吉馬酮含量論文【摘要】目的:建立反相-高效液相色譜法(RP-HPLC)測定莪術(shù)油凝膠劑中莪術(shù)醇和吉馬酮的含量的方法。方法:在ODS-C18色譜柱上采用流動相乙睛-0.025mol/L磷酸(45:55)(三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.5)溶液進(jìn)行梯度洗脫：乙腈：0～5min，70%;5～30min，70%→90%；30～50min，90%。檢測波長213nm，流速1.0ml/min。結(jié)果:在0.3～7μg范圍內(nèi)，莪術(shù)醇對照品的峰面積（Y）與其濃度（X）呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r

2、=0.9996，在0.3～7μg范圍內(nèi).freelericOil)是從姜科植物蓬莪術(shù)(CurcumaphaeocaulisValeton)、廣西莪術(shù)(Curcuntakastation色譜工作站；AL204型電子分析天平（梅特勒-托利多公司生產(chǎn)）；18B-C型高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)）。1.2試劑及藥品乙腈（HPLC級），天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司生產(chǎn)；甲醇(HPLC級），天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司生產(chǎn)；吉馬酮（分子量：206.32，中國藥品生物制品檢定所提供，批號：（111665-20

3、0401）；莪術(shù)醇(分子量：236.34,中國藥品生物制品檢定所，批號：100185-200405）；莪術(shù)油試樣品（瑞安天瑞）；莪術(shù)油凝膠劑（本院自制，批號為：0603051，0603062，0603093）；其他制劑均為分析純。1.3色譜條件色譜柱：25cm×4.6mm，5μm，HypersilODSC18反相色譜柱，流動相：乙睛-0.025mo1/L磷酸(45:55)(三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.5)梯度洗脫：乙腈：0～5min，70%；5～30min，70%→90%；30～50min，90%，柱溫：25

4、℃，流速：1.0ml/min，檢測波長：213nm，進(jìn)樣量20μl。2方法和結(jié)果2.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)在1.3的色譜測定條件下，莪術(shù)醇與吉馬酮峰形對稱，保留時間分別約為20min和26min，理論塔板數(shù)3000，分離度大于4，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。2.2最低檢出量測定調(diào)整檢測靈敏度及進(jìn)樣量，測定峰高為基線噪聲3倍時的進(jìn)樣量，作為檢出限，按該方法測得的最低檢測限為10ng·ml-1，最低檢測量為0.2ng。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取莪術(shù)醇對照品10mg、吉馬酮對照品10mg分別置10ml容量瓶中，用乙

5、腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。另取莪術(shù)醇對照品溶液和吉馬酮對照品溶液各5ml于25ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，得對照品混合溶液。精密量取對照品混合溶液2、3、4、6、10、15、18ml，分別置25ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，分別精密注入20μl，記錄峰面積，以峰面積對濃度進(jìn)行回歸分析，得莪術(shù)醇回歸方程為：Y=12765.7035X-34.1235(r=0.9996)，線性范圍為0.3～7μg，吉馬酮回歸方程為：Y=63881.3685X+28.1730(r=0.9997)，線

6、性范圍為0.3～7μg。2.4回收率試驗(yàn)在葡萄糖注射液中加入莪術(shù)醇對照品、吉馬酮對照品各適量，按上述色譜條件進(jìn)樣(20μl)，計(jì)算莪術(shù)醇和吉馬酮的回收率，結(jié)果見表1、表2。2.5精密度試驗(yàn)取對照品混合溶液，在上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5針(20μl)，以峰面積計(jì)算精密度，結(jié)果莪術(shù)醇和吉馬酮的RSD分別為1.81%和0.7%。2.6樣品含量測定取不同批次莪術(shù)油凝膠1.0ml，置100ml容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻，取一定量置于5ml離心管中，以4000r/min轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液20μl進(jìn)

7、樣，記錄峰面積，代入回歸方程計(jì)算，結(jié)果批號為0603051、0603062、0603093的樣品含量分別為標(biāo)示量的99.91%，100.10%，99.42%，結(jié)果見表3。3.1分析方法的選擇莪術(shù)油的主要有效成分為莪術(shù)醇，但莪術(shù)醇的相對含量很小，而其他組分如吉馬酮等的含量相對很高，因此，以選擇吉馬酮為含量測定目標(biāo)成分，同時測定莪術(shù)醇的含量4。取吉馬酮對照品，加入乙腈溶解并稀釋制成5μg/ml的溶液，在UV-7502PC型紫外可見分光光度計(jì)上190～400nm處進(jìn)行掃描，莪術(shù)醇和吉馬酮對照品的最大吸收波長

8、分別在205nm和213nm，故以213nm作為液相色譜檢測波長。若采用UV方法測定凝膠劑中的吉馬酮含量會有較大的誤差，故本研究選擇了專屬性較高的HPLC法。3.2流動相組成的優(yōu)化參照各類文獻(xiàn)5，選用優(yōu)化后流動相：乙腈-0.025mo1/L磷酸(45:55)(三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.5)進(jìn)行梯度洗脫：乙腈：0～5min，70%；5～30min，70%→90%；30～50min，90%。檢測波長213nm，流速1.0ml·min-1。結(jié)果表明:凝膠樣品中莪術(shù)醇