葛根總黃酮提取物的含量測(cè)定研究

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1、葛根總黃酮提取物的含量測(cè)定研究作者：李婷，鄭彩美，張彤，陶建生【摘要】　　目的測(cè)定葛根提取物中有效成分葛根素及總黃酮的含量。方法采用高效液相色譜法對(duì)其中的葛根素進(jìn)行含量測(cè)定；采用紫外分光光度法對(duì)其中的總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果葛根素含量在0.017536～1.7536μg范圍時(shí)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.99997），加樣回收率為99.50%，RSD為1.36%；總黃酮的線性范圍為2.192～10.92μg·ml-1（r=0.99955），加樣回收率為100.69%，RSD為1.29%。結(jié)論所建立的分析

2、方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，重復(fù)性好，可用于葛根提取物中葛根素和總黃酮的測(cè)定?！娟P(guān)鍵詞】葛根提取物；高效液相色譜法；紫外分光光度法　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofpuerarinandtotalflavonoidsinextractsofPuerarialabta(asilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇-水(26∶74)；流速1.0ml/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm；進(jìn)樣量20μl。按上述條件進(jìn)行含量測(cè)定，此條件下，葛根

3、素能與其它組分達(dá)到基線分離，與相鄰的色譜峰分離度大于1.5，保留時(shí)間適中。陰性對(duì)照溶液對(duì)其含量無干擾。葛根素峰理論塔板數(shù)均不小于3000。結(jié)果見圖1。　　2.1.2對(duì)照品貯備液配制精密稱取葛根素對(duì)照品5.48mg置25ml量瓶中，加30%乙醇使溶解并定容至刻度，濃度為219.2μg·ml-1，作為對(duì)照品貯備液?！　?.1.3供試品溶液配制取葛根總黃酮提取物約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加入30%乙醇適量，溶解后定容。再?gòu)闹芯芪?ml置10ml量瓶中，以30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm

4、微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液?！　?.1.4空白溶液的制備取30%乙醇溶液10ml，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得?！　?.1.5線性關(guān)系考察分別精密量取“2.1.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液適量，依次稀釋，30%乙醇溶液定容，分別配制成0.8768，2.192，21.92，43.84，65.76，87.68μg·ml-1的一系列濃度梯度的對(duì)照品溶液。分別吸取上述的對(duì)照品溶液各20μl，按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y，葛根素對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)X（μg·ml-1），

5、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=80.583X-16.705，r=0.99997。表明葛根素在進(jìn)樣量0.017536～1.7536μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系。　　2.1.6精密度實(shí)驗(yàn)取“2.1.5”項(xiàng)下低、中、高濃度的3個(gè)對(duì)照品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定。分別連續(xù)進(jìn)樣5次，得葛根素的峰面積，計(jì)算RSD分別為1.03%，0.29%，0.37%。表明儀器精密度良好?！　?.1.7樣品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，按0，1，2，4，8，12，24h時(shí)間間隔，在“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定

6、，得葛根素峰面積，RSD為0.89%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定?！　?.1.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品5次，照“2.1.3”項(xiàng)下方法處理，制備樣品供試液。按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定，得葛根素峰面積，計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果RSD為0.69%。表明重復(fù)性良好。　　2.1.9加樣回收實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的樣品9份，每份約5mg，加入不同量的葛根素對(duì)照品溶液，按“2.1.3”項(xiàng)下的方法制備供試液，按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）結(jié)果表明色譜條件具有較

7、強(qiáng)的可靠性?！　?.1.10提取物中葛根素含量測(cè)定取3批葛根總黃酮提取物適量，精密稱定，按“2.1.3”項(xiàng)下制備，按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)定結(jié)果按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見表2。表2提取物中葛根素含量測(cè)定結(jié)果（略）　　2.2葛根總黃酮含量測(cè)定　　2.2.1供試品溶液的制備取葛根總黃酮提取物約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加入30%乙醇適量，溶解后定容。再?gòu)闹芯芪?ml置100ml量瓶中，以30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液?！　?.2.2線性關(guān)系考察精密量取“2.1.2”項(xiàng)下的

8、對(duì)照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml分別置于50ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，配制成2.192～10.92μg·ml-1的一系列濃度梯度的對(duì)照品溶液。以30%乙醇為空白對(duì)照，250nm處測(cè)定吸收度。以吸光度值為縱坐標(biāo)Y，葛根素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)X（μg·ml-1），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=13.688X-0.020，r=0.99955，表明總黃酮含量在2.192～10.92μg·ml-1范圍內(nèi)，與