葛根提取物樣品中總黃酮和葛根素含量的測定

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1、葛根提取物樣品中總黃酮和葛根素含量的測定一、實驗背景介紹1.黃酮類化合物的定義、結(jié)構(gòu)與分類黃酮類化合物是在植物中分布非常廣泛的一類天然產(chǎn)物。此類化合物多為黃色，且具有酮式羰基，故稱黃酮類化合物。1952年以前，黃酮類化合物主要是指基本母核為2-苯基色原酮的一系列化合物。81812'3'OO21'7274'63636'5'4545O峰帶II，220~280nmA環(huán)苯甲?；到y(tǒng)O峰帶I，300~400nmB環(huán)桂皮?；到y(tǒng)色原酮2-苯基色原酮（黃酮）現(xiàn)在的黃酮類化合物則泛指兩個苯環(huán)（A與B環(huán)）通過中央三碳鏈相互連接而成的一

2、類化合物。12''81'3O24'7636'5'54C6-C3-C6黃酮類化合物的苷元的結(jié)構(gòu)類型根據(jù)三碳鏈氧化程度、B環(huán)（苯基）連接位置（2-位或3-位）以及三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀可分為黃酮、異黃酮、二氫黃酮、查爾酮、花色素、橙酮類、黃烷醇類等。2.葛根及其所含黃酮的功能介紹葛根為豆科植物野葛的干燥根，其味甘、辛、性平，既是中藥材又是營養(yǎng)豐富的食用原料。葛根是我國一種傳統(tǒng)中藥，對于葛根的藥用價值早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，葛根具有解痙退熱、生津、透疹、升陽止瀉等功能。黃酮類化合物是葛根中的主要活性類成分之一，同其它大多數(shù)

3、黃酮類化合物相似，葛根黃酮類化合物也具有多種藥理功能，如改善血液循環(huán)、降血壓、降血糖、降血脂、抑制動脈硬化，抗心率失常，抗血小板聚集、抗腫瘤、抗缺氧與抗氧化等。此外，葛根目前己被衛(wèi)生部認(rèn)定為藥食兩用的山地植物。葛根素是從葛根中所提取得到的一種異黃酮類化合物，是葛根總黃酮中的一種。實驗證明其有擴張心腦血管，降低心肌氧耗，改善心肌收縮功能和促進(jìn)血液微循環(huán)作用，可用于治療冠心病、視網(wǎng)膜動、靜脈阻塞和突發(fā)性耳聾等微循環(huán)障礙病?；谏鲜鲲@著的藥用價值，對葛根提取物中總黃酮以及葛根素含量的測定具有重要的意義。二、實驗?zāi)康模?.了解

4、雙光束紫外可見分光光度計和高效液相色譜的基本結(jié)構(gòu)，并掌握相應(yīng)的基本操作2.能夠通過化合物的紫外光譜掃描曲線，選擇合適的測定波長3.掌握高效液相色譜法定性定量分析的基本原理4.學(xué)習(xí)葛根提取物中總黃酮和葛根素的測定方法三、實驗原理1.總黃酮含量的測定原理大多數(shù)黃酮類化合物分子中存在桂皮?；捅郊柞；M成的交叉共軛體系，其在200～400nm波長的區(qū)域內(nèi)存在兩個紫外吸收帶，即位于帶Ⅰ(300～400nm)和帶Ⅱ(240～280nm)。其中帶Ⅱ的吸收峰較強，是定量分析的重要依據(jù)，可采用紫外分光光度法測定樣品中總黃酮類化合物的含

5、量。由于葛根素是葛根中含量較多且具有代表性的一種黃酮，因而常以其為參考標(biāo)準(zhǔn)來測定葛根及其附加產(chǎn)品中總黃酮的含量。2.葛根素含量的測定原理葛根提取物中的組份較多，具體到葛根素的測定，則首先應(yīng)將其與其他組分分離開來再進(jìn)行測定，而高效液相色譜法是天然產(chǎn)物分離分析的重要手段，可通過優(yōu)化色譜操作條件實現(xiàn)葛根素的分離和測定。根據(jù)色譜定性原理，即同一種物質(zhì)在相同色譜操作條件下的保留時間一致，通過與葛根素標(biāo)準(zhǔn)品保留時間的對比，來確定提取物色譜圖中的葛根素色譜峰。根據(jù)色譜定量分析的原理，即在相同的色譜操作條件下，色譜峰的峰面積與待測物質(zhì)

6、的濃度成正比，依此可測定葛根素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再由提取物溶液中葛根素的峰面積求出相應(yīng)的濃度，最終計算出提取物中葛根素的含量。四、主要儀器與試劑主要儀器：TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計；ThermoFisherUltiMate3000高效液相色譜儀（配有UV檢測器和chromeleon色譜工作站），分析天平；超聲波清洗器。主要試劑：1.0mg/mL葛根素標(biāo)準(zhǔn)儲備液（體積比為30/70的乙醇水做溶劑）；葛根提取物A；葛根提取物B；甲醇（色譜純）；無水乙醇（分析純）；超純水五、實驗步驟1.葛根提

7、取物中總黃酮含量的測定（1）精密量取0.20、0.40、0.60、0.80和1.00mL的葛根素標(biāo)準(zhǔn)儲備液至于100mL容量瓶中，用30%的乙醇水溶液稀釋至刻度，搖勻。（2）精密稱取10mg葛根提取物A，將其轉(zhuǎn)移至50mL的容量瓶中，用30%的乙醇水溶液稀釋至刻度，搖勻，之后再精密量取0.50mL溶液至于10mL容量瓶中，用30%的乙醇水溶液稀釋至刻度，搖勻，以上步驟平行三次。對葛根提取物B做相同處理。（3）用紫外分光光度計掃描葛根素標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的吸收曲線（濃度可隨機選?。?，確定最大吸收波長，然后采用定量測量的方式，測

8、定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（4）測定步驟（2）中葛根提取物A和B最終稀釋樣品的吸光度，取平均值，再對比標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得出相應(yīng)的濃度，最后分別計算兩種葛根提取物中總黃酮的含量。二、葛根提取物中葛根素的含量測定（1）精密量取0.20、0.40、0.60、0.80和1.00mL的葛根素標(biāo)準(zhǔn)儲備液至于10mL容量瓶中，用10%的