肺炎鏈球菌檢測方法及耐藥研究

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1、肺炎鏈球菌檢測方法及耐藥研究【關(guān)鍵詞】肺炎鏈球菌檢測方法耐藥研究肺炎鏈球菌（StreptococcusPneumoniae,SP）是兒科社區(qū)獲得性感染的主要病原菌之一，它可引起兒童肺炎、腦膜炎、敗血癥、中耳炎、鼻竇炎。據(jù).Porcel等人采用該試劑盒對患者的胸水進行檢測，發(fā)現(xiàn)敏感性為70.6%，特異性為93.3%。該方法較突出的優(yōu)點是抗生素的使用并不影響檢測結(jié)果的準確性，因此它不能用于評價抗生素治療效果。在感染后1月內(nèi)該試驗均可陽性，這也造成了那些反復(fù)感染的病例被誤診的潛在可能性。特別在兒童中，由于SP的定植造成該試驗

2、非特異性陽性的問題已逐漸引起了關(guān)注。盡管該試驗在SP感染的兒童中敏感性較高，但在尿抗原檢測呈陽性的病例中仍有7%～15%的病例沒有SP感染的臨床證據(jù)〔4〕。ICT雖然在SP鼻咽攜帶者中存在假陽性結(jié)果，但由于ICT標本采集簡便，不具創(chuàng)傷性，不受先前抗生素治療干擾，具有較高的敏感性和特異性，15min便可完成檢測等優(yōu)點，是快速診斷SP感染的簡便方法。　　1.3聚合酶鏈式反應(yīng)聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）敏感性高，特異性強，實時熒光定量PCR可對擴增產(chǎn)物進行可重復(fù)定量檢測，在擴增的每個循環(huán)中至少收集一次熒光數(shù)據(jù)，對擴增產(chǎn)物進行實時

3、監(jiān)控，從而增加PCR的敏感性和特異性。2001～2004年，AlbanLeMonnier等〔5〕對社區(qū)獲得性肺炎患者的胸腔積液進行SP16SrDNA基因檢測，發(fā)現(xiàn)該試驗的敏感性為77%。在抗生素治療初期，PCR不受其干擾，因此為早期診斷提供了較可靠的依據(jù)。然而，與ICT相比，PCR是一種復(fù)雜、耗時的檢測方法，還未完全標準化，從而妨礙其成為SP臨床診斷方法，主要作為實驗研究的技術(shù)方法?！　?耐藥現(xiàn)狀及耐藥機制　　2.1β內(nèi)酰胺類抗生素在上個世紀四、五十年代，當青霉素被應(yīng)用于臨床初期，SP對青霉素是相當敏感的。當時大部分菌

4、株的青霉素MIC0.015～0.03mg/L。上世紀60年代，在澳大利亞和新幾內(nèi)亞，部分SP出現(xiàn)了對青霉素敏感性降低的現(xiàn)象，分離出對青霉素耐藥的SP（penicillinresistantstreptococcuspneumoniae,PRSP）。70年代末，南非報道了對青霉素高水平耐藥的菌株，這些菌株的青霉素MIC高達2～4mg/L。在美國，SP對青霉素的耐藥情況在70年代及80年代初沒有顯著的變化，持續(xù)保持在10%或更低。但在80年代末及整個90年代，SP對青霉素的耐藥性發(fā)生了戲劇性的變化，不敏感率顯著增加。有報

5、道稱，在1993～2004年，耐藥菌株增加了近30倍。亞洲地區(qū)耐藥性病原監(jiān)測網(wǎng)（ANSORP）的監(jiān)測結(jié)果表明SP對青霉素的耐藥率為29.4%，不敏感率為52.4%〔6〕。2000～2002年兒童鼻咽部分離887株SP對青霉素耐藥率為6.4%，青霉素不敏感率39.9%〔7〕。　　2001年美國臨床實驗室國家標準委員會（NationalmitteeforClinicalLaboratoryStandards,NCCLS）判斷SP對青霉素耐藥的標準是：MIC≥2mg/L為耐藥；MIC0.12～1.0mg/L為中度耐藥；≤0.

6、06mg/L為敏感。青霉素耐藥的產(chǎn)生是由于細胞壁上一種或多種青霉素結(jié)合蛋白（PBP）的改變，這種改變同樣可以影響到PBP與整個β內(nèi)酰胺類抗生素的結(jié)合〔8〕。如果抗生素在感染部位有足夠濃度的話，這種耐藥機制即可被克服。在呼吸道感染的情況下，只要給予適當劑量的藥物，大部分的SP對β內(nèi)酰胺類抗生素，比如靜脈滴注頭孢曲松和口服阿莫西林仍然保持敏感?！　?.2大環(huán)內(nèi)酯類和林可霉素類抗生素SP對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥率在近20～30年間迅速增長。AlexanderProject〔9〕研究結(jié)果顯示，1998～2000年全球紅霉素耐

7、藥率為24.6%。亞洲國家耐藥程度比歐美國家嚴重，ANSORP的監(jiān)測結(jié)果表明，1998～2001年亞洲地區(qū)對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的SP（macrolideresistantstreptococcuspneumoniae,MRSP）占59.3%〔10〕。我國北京、上海、廣州三家兒童醫(yī)院上呼吸道感染患兒鼻咽部SP紅霉素耐藥率為84.3%〔6〕。SP對大環(huán)內(nèi)酯類的藥敏試驗分為三種情況：敏感（MIC1mg/L）、低度耐藥（MIC1～32mg/L）和高度耐藥（MIC>64mg/L）。低度耐藥和高度耐藥的臨床特點即對現(xiàn)有的

8、所有大環(huán)內(nèi)酯類藥物均出現(xiàn)耐藥，兩者不同之處在于前者對林可霉素通常敏感。兩者的耐藥機制也有所不同：低度耐藥常常由mefA基因介導(dǎo)，耐藥表型為M型（即對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥而對林可霉素類敏感）；高度耐藥常常由ermB基因介導(dǎo)，耐藥表型為MLSB型（即對大環(huán)內(nèi)酯類、林可霉素類和鏈陽霉素B類均耐藥）。M型的耐藥機制為泵出機制，即將細胞內(nèi)的大環(huán)內(nèi)