瓜馥木化學(xué)成分及其抗腫瘤活性研究

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1、瓜馥木化學(xué)成分及其抗腫瘤活性研究【摘要】目的研究瓜馥木的化學(xué)成分，尋找抗腫瘤的活性成分。方法采用硅膠柱色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，運(yùn)用波譜法進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，并進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選。結(jié)果從瓜馥木根的乙醇提取物中分離得到1個(gè)化合物，經(jīng)理化常數(shù)和波譜(EI²MS，1H²NMR，13C²NMR)分析，鑒定為馬兜鈴內(nèi)酰胺AⅡ，化合物馬兜鈴內(nèi)酰胺AⅡ?qū)Ψ蜗侔〨LC²82、白血病細(xì)胞株HL60的細(xì)胞株的IC50分別為：234.35，101.17μmol·L-1。結(jié)論馬兜鈴內(nèi)酰胺AⅡ生物堿化合物具有一定的抗腫瘤活性。【關(guān)鍵詞】瓜馥木化學(xué)成分分離和提純馬兜鈴內(nèi)酰胺A

2、Ⅱ抗腫瘤活性瓜馥木Fissistigmaoldhamii（Hemsl.）Merr.為番荔枝科（Annonaceae）瓜馥木屬(Fissistigma)植物，根入藥，性溫味辛，具有祛風(fēng)除濕、鎮(zhèn)痛消腫、活血化淤等功效，主要用于跌打損傷、關(guān)節(jié)炎及坐骨神經(jīng)痛的治療〔1〕。為尋找反映瓜馥木中抗炎、鎮(zhèn)痛活性特征成分，我們對(duì)瓜馥木化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，已報(bào)道O-甲基芒籽堿(O-methyl-moschtaoline)、酸花木堿(毛葉含笑堿，oxylopine)、氧代克斑寧(7-oxocrebanine)和胡蘿卜苷(daucosterol)等成分的研究〔2〕。本文報(bào)道另一個(gè)化合物的分離和結(jié)構(gòu)鑒定

3、，并探討該化合物對(duì)肺腺癌GLC-82及HL60白血病細(xì)胞株的抗腫瘤活性。　　1儀器與材料　　顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度計(jì)未校正)；AB-HS型質(zhì)譜儀；DRX-400型超導(dǎo)核磁共振儀，TMS為內(nèi)標(biāo)。3164型二氧化碳培養(yǎng)箱(美國(guó)FORMA公司)；比色采用ThermoLabsystemsMultiskanMK3全自動(dòng)酶標(biāo)儀。　　藥材采于江西，由江西中醫(yī)學(xué)院賴學(xué)文副教授鑒定為瓜馥木Fissistigmaoldhamii（Hemsl.）Merr.，標(biāo)本存于廣東醫(yī)學(xué)院藥學(xué)教研室?！　?方法與結(jié)果　　2.1提取與分離瓜馥木根藥材經(jīng)粉碎后用乙醇加熱回流提?。?h×3次），合并濾液，減壓濃縮得總浸膏59

4、0g。浸膏用5%HCl捏溶處理后其酸不溶性部分用蒸餾水洗至中性，用水分散均勻，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯進(jìn)行提取，回收溶劑得石油醚部分33.2g，氯仿部分63g，醋酸乙酯部分45.4g。氯仿部分反復(fù)進(jìn)行硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇為洗脫劑，得馬兜鈴內(nèi)酰胺AⅡ化合物(15mg)?！　?.2結(jié)構(gòu)鑒定采用化學(xué)和光譜的方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。該化合物與生物堿試劑反應(yīng)呈陽(yáng)性，推測(cè)該化合物為生物堿。EI-MS給出分子離子m/z265(M+,100)，結(jié)合1H-NMR、13C-NMR，推斷分子式為C16H11NO3。UVλMeOHmaxnm:230,265,277；IRKBrmaxcm-1：3450

5、，3251（羥基，NH），1691，1656(羰基)，1614，1502(苯環(huán))；EI-MS譜：265(M+,100)，250(M+-CH3,51)，222(M+-CH3-CO,18)，UV，IR，EI-MS的特征顯示該化合物屬于馬兜鈴內(nèi)酰胺類成分〔3〕。1H-NMR顯示在δ4.04(3H,s)為一甲氧基信號(hào)；δ7.08～9.26ppm處有6個(gè)芳香質(zhì)子信號(hào)，其中δ9.26（1H,m），7.49（2H,m），7.77（1H,m）顯示出未取代的D環(huán)有4氫，H-5由于受3個(gè)環(huán)的去屏蔽作用，出現(xiàn)在最低場(chǎng)的δ9.26ppm處，可知δ7.49（2H,m）為H-6,H-7，δ7.77（1H,m）

6、為H-8；δ7.08（1H,s）及7.68（1H,s）二個(gè)孤立芳香質(zhì)子信號(hào)顯示A、C環(huán)上各有一孤立芳香質(zhì)子，因此，A環(huán)中有兩個(gè)芳香質(zhì)子被取代。13C-NMR顯示在δ171.8ppm處為內(nèi)酰胺羰基信號(hào),在δ150.7～107.1有14個(gè)芳碳信號(hào)，DEPT顯示有9個(gè)季碳、6個(gè)叔碳信號(hào)，δ57.4處為甲氧基。該化合物的UV，IR，1H-NMR，13C-NMR，EI-MS數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)〔3，4〕中的馬兜鈴內(nèi)酰胺AⅡ（AristolactamAⅡ）數(shù)據(jù)基本一致。因此，該化合物被鑒定為AristolactamAII，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1?！　D1瓜馥木中各化合物結(jié)構(gòu)式（略）　　　2.3樣品體外培養(yǎng)抗腫瘤作

7、用實(shí)驗(yàn)　　2.3.1實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)分為①空白組：每孔僅為1640培養(yǎng)液，在測(cè)光密度值（OD值）時(shí)用于調(diào)“0”；②對(duì)照組：每孔為含1640培養(yǎng)液稀釋的單細(xì)胞懸液；③實(shí)驗(yàn)組：又分1.00×103，1.00×102，10.00，1.00，0.10，1.00×10-2μmol·L-1馬兜鈴內(nèi)酰胺AⅡ組，即每孔含1640培養(yǎng)液稀釋的單細(xì)胞懸液和不同濃度馬兜鈴內(nèi)酰胺AⅡ。精密稱量馬兜鈴內(nèi)酰胺AⅡ后用少量DMSO充分溶解，再用1640培養(yǎng)基稀釋成不同濃度備用。各組每孔溶液總體積均為2