中藥平顫方加褪黑素對(duì)pd模型大鼠行為和前腦多巴胺及其代謝的影響論文

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1、中藥平顫方加褪黑素對(duì)PD模型大鼠行為和前腦多巴胺及其代謝的影響論文嚴(yán)麗榮高放周亞平侯莉苗曼悌許豪勤陳艷許慶狄榮科【摘要】目的觀察中藥平顫方加褪黑素（MT）對(duì)N甲基4苯基1,2,3,6四氫吡啶（MPTP）所致帕金森病（PD）模型大鼠行為學(xué)和前腦多巴胺(DA)及其代謝產(chǎn)物含量的影響，探討中藥與MT聯(lián)合治療PD的療效及作用機(jī)制。方法SD大鼠60只，分5個(gè)組：對(duì)照組、模型組、MT組、中藥組、中藥+MT組。模型組和各治療組大鼠腹腔注射MPTP建立PD模型，用爬桿法和迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)量大鼠行為學(xué)改變和智

2、力狀況，用高壓液相電化學(xué)法測(cè)定前腦DA、高香草酸（HVA）及二羥基苯乙酸（DOPAC）含量。結(jié)果PD模型大鼠出現(xiàn)不同程度爬桿能力下降和智力減退，與模型組相比各治療組大鼠行為學(xué)異?？刹糠指纳疲≒＜0.01）；模型組DA、HVA、DOPAC含量均較對(duì)照組顯著降低（P＜0.01），各治療組DA、HVA、DOPAC含量較對(duì)照組低，但較模型組明顯增高（P＜0.05.freelg/ml，30mg/kg腹腔注射，1次/d，共7d。再用爬桿法進(jìn)行篩選，篩選48只PD模型(1.5～2.0分)大鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)；隨機(jī)抽取

3、36只作為治療組（中藥組、MT組、中藥組+MT組，每組各12只），其余12只為模型組。1.2爬桿實(shí)驗(yàn)和迷宮實(shí)驗(yàn)各治療組和模型組大鼠于末次注射MPTP及用藥/水后7、14、21d，進(jìn)行爬桿試驗(yàn)，每只大鼠允許爬桿3次，計(jì)算平均分。爬桿實(shí)驗(yàn)用直徑35mm、高1000mm的光滑不銹鋼管，垂直豎立，將大鼠頭向下放置在金屬桿的頂部，使其沿桿自然爬下，觀察動(dòng)物在下行過(guò)程中的行為，并按標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：四肢并用，一次順利從桿上爬下為0分；一步一步螺旋向下爬行但兼有后肢滑行行為為0.5分；上桿后間歇停頓數(shù)次

4、后爬下，但可抱緊金屬桿為1分；滑行后掉落為1.5分；不能抓桿，直接掉落為2.0分。同時(shí)對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行“T”形迷宮實(shí)驗(yàn)，測(cè)定動(dòng)物智力狀況，每只大鼠走迷宮3次，計(jì)算平均錯(cuò)誤次數(shù)。1.3中藥平顫方及治療中藥平顫方由銀杏葉、黃芪、天麻、白芍、鉤藤、連翹、生甘草、野葛根、大葉紅景天、黃連等組成，制成濃縮煎劑。每日20:00時(shí)胃飼中藥平顫方煎劑3ml（相當(dāng)于中藥10g），同時(shí)腹腔注射MT10mg/kg，連續(xù)治療21d；模型組，每日同時(shí)胃飼3ml生理鹽水和腹腔注射1ml生理鹽水。1.4前腦組織生化DA及其代謝

5、產(chǎn)物測(cè)定治療21d后，斷椎法處死大鼠，取右側(cè)腦，迅速于冰上沿視交叉前方做橫切面分離前腦，置于勻漿器中，加入1ml預(yù)冷的氯乙酸，制成勻漿。置于臺(tái)式冷凍離心機(jī)中11000r/min離心30min，留取上清液，用高壓液相電化學(xué)法測(cè)定DA及其代謝產(chǎn)物高香草酸（HVA）和二羥基苯乙酸（DOPAC），均以ng/g腦濕重計(jì)量。1.5試劑與儀器MT為Sigma公司產(chǎn)品，使用前先用無(wú)水乙醇溶解，然后加生理鹽水稀釋,MT濃度3mg/L，無(wú)水乙醇濃度小于0.5％(v/v)。MPTP、DA、DOPAC、HVA、辛烷磺酸

6、鈉鹽均為Sigma公司產(chǎn)品，其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。高效液相電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)：E）。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)用x±s表示，用SPSS10.0軟件，多組間比較采用方差分析。2結(jié)果2.1PD大鼠智力狀況改變模型大鼠出現(xiàn)不同程度的行為智力和運(yùn)動(dòng)障礙，表現(xiàn)為動(dòng)作遲緩、震顫、豎毛，對(duì)外界刺激反應(yīng)低下。用藥治療后癥狀改善或消失，“T”型迷宮實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)減少；隨著治療時(shí)間延長(zhǎng)，動(dòng)物智力恢復(fù)明顯（表1）。2.2PD大鼠行為改變注射MPTP后60min，大鼠協(xié)調(diào)能力開(kāi)始降低，下滑加快，甚至不能抱桿、墜落。持續(xù)注射M

7、PTP7d，爬桿實(shí)驗(yàn)測(cè)定，選擇1.5～2.0分大鼠為模型組和治療組(表2)。造模后治療組協(xié)調(diào)能力逐漸恢復(fù)，癥狀改善，與模型組比較，治療組行為恢復(fù)明顯(表2)。表1各組大鼠迷宮試驗(yàn)智力測(cè)定與對(duì)照組比較：1)P＜0.05，2)P＜0.01；與模型組比較：3)P＜0.05，4)P＜0.01，下表同表2各組大鼠爬桿實(shí)驗(yàn)測(cè)定評(píng)分2.3PD大鼠前腦DA及其代謝產(chǎn)物含量改變模型組大鼠DA、DOPAC、HVA均較對(duì)照組顯著降低，用藥21d后治療組DA、DOPAC、HVA含量雖較對(duì)照組降低，但較模型組升高，尤其以

8、HVA和DOPAC含量增加明顯（表3）。中藥+MT組DA、DOPAC、HVA含量增高明顯，中藥組與MT組間差異不顯著。表3各組大鼠前腦DA及其代謝產(chǎn)物含量變化3討論近年來(lái)對(duì)MT的藥理作用的研究越來(lái)越多，尤其是其抗氧化及清除自由基的作用受到重視〔6〕。中醫(yī)理論認(rèn)為PD的病源是肝腎虧虛，研究發(fā)現(xiàn)中藥可以有效地延緩和阻止DA能神經(jīng)元的變性、凋亡，提高人腦中DA的含量，從而延緩病程、減輕病癥〔3～5〕。中醫(yī)藥治療PD具有副作用少，與西藥配伍應(yīng)用能提高療效的優(yōu)點(diǎn)，使患者的生活質(zhì)量得到提高。中樞神經(jīng)DA能神