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1、肝功能異?;颊哐逯凶陨砜贵w檢測及意義作者:楊濱,陳靜,薛恒,劉燦,歐啟水【關(guān)鍵詞】肝炎,自身免疫性;,自身抗體;,熒光抗體技術(shù)炎 摘要:目的探討肝病相關(guān)自身抗體在肝功能異常患者血清中的陽性率及其診斷價值。方法以生物薄片馬賽克技術(shù)制備的Hep2細(xì)胞、猴肝、心肌、鼠肝、鼠腎、胃共6種組織細(xì)胞為抗原基質(zhì),間接免疫熒光法檢測肝病相關(guān)自身抗體,根據(jù)熒光反應(yīng)強(qiáng)弱判定結(jié)果。結(jié)果80例肝功異?;颊撸ǜ闻K功能異常,ALT>50U/L)自身抗體陽性率為11.25%,其中抗核抗體(ANA)、抗平滑肌抗體(SMA)
2、及抗線粒體抗體(AMA)的陽性率分別為7.5%、5%和6.25%;女性患者自身抗體的檢出率明顯高于男性患者(P<0.05);病毒性肝炎標(biāo)志物陰性組自身抗體檢出率明顯高于陽性組(P<0.05)。結(jié)論高滴度自身抗體對自身免疫性肝病的診斷有一定的價值,肝功能異常的非病毒性肝炎病人適合進(jìn)行肝病相關(guān)自身抗體的檢測?! £P(guān)鍵詞:肝炎,自身免疫性;自身抗體;熒光抗體技術(shù)炎 自身免疫性肝臟疾病是一組病因與發(fā)病機(jī)理尚不完全清楚但與自身免疫相關(guān)的一組疾病,包括自身免疫性肝炎(AIH)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(P
3、BC)和原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)[12]。實驗室檢測特別是相關(guān)自身抗體的檢測對自身免疫性肝病的診斷具有重要意義。某些自身抗體由于缺乏疾病特異性,不僅見于自身免疫性疾病,也出現(xiàn)于10%~15%的病毒性肝炎或其他免疫介導(dǎo)的疾病當(dāng)中[1]。為了探討包括抗核抗體(ANA)、抗平滑肌抗體(SMA)、抗肝腎微粒體Ⅰ型抗體(LKMⅠ)、抗線粒體抗體(AMA)等自身抗體在肝病患者中檢出的陽性率和意義,筆者收集80例肝功能明顯異常的各種肝病患者,檢測其血清中上述幾種自身抗體,報告如下。 1臨床資料 1.1一般資
4、料選擇2005年2月~5月來福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診的80例肝功能明顯異常的各種肝病患者,男性57例,女性23例,年齡(46±15.6)歲(20~75歲)。80例中,確診為病毒性肝炎54例,包括乙肝48例、丙肝5例、甲肝1例;非甲丙戊肝炎3例,包括膽石癥、酒精肝和肝豆?fàn)詈俗冃愿?例;其余23例為不明原因的肝功能異常者。同時收集30例健康體檢者作為對照組,年齡(41±12.5)歲(22~61歲)?! ?.2方法所有對象均于清晨空腹抽取靜脈血2mL,分離血清,以ELISA法做病毒性肝炎血清標(biāo)志物檢測,
5、同時以間接免疫熒光法檢測血清中的相關(guān)自身抗體,包括ANA、SMA、LKMI及AMA。試劑來源為德國歐蒙免疫試劑公司生產(chǎn)的自身抗體試劑盒。血清檢測時主要采用Hep2細(xì)胞、猴肝、鼠肝、鼠腎、心肌和胃組織冰凍切片作為抗原,采用生物薄片馬賽克技術(shù)將帶有組織細(xì)胞的6種切片組成一個反應(yīng)區(qū),4℃保存?zhèn)溆?。將待檢血清1∶100稀釋后與組織細(xì)胞孵育30min,后加入熒光素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白結(jié)合30min,經(jīng)洗片、封片后熒光顯微鏡觀察結(jié)果;ELISA法檢測全部血清病毒性肝炎標(biāo)志物,包括抗HAVIgM、HBsAg、HBs
6、Ab、HBeAg、HBeAb、HBcAb及抗HCV抗體和抗HEVIgM/IgG等,其中抗HAVIgM試劑盒購于上海華泰生物工程實業(yè)有限公司,HBV試劑盒購于上海榮盛生物技術(shù)有限公司,抗HCV抗體和抗HEVIgM/IgG購自洛陽華美生物工程有限公司?! ?.3結(jié)果判定在同一張切片中根據(jù)熒光模式特點可同時判定出下列幾項自身抗體:ANA、AMA、SMA、LKM和抗心肌抗體(ASA)。血清稀釋度ANA>1∶1000、SMA>1∶320、AMA及LKM>1∶100時組織細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)特異性綠色熒光
7、判為陽性,未見熒光反應(yīng)者為陰性?! ?.4統(tǒng)計學(xué)方法計數(shù)資料用χ2檢驗?! ?結(jié)果 2.1自身抗體的陽性檢出率80例患者中,9例(11.25%)出現(xiàn)1項或>1項自身抗體陽性:ANA(+)且AMA(+)3例、單純AMA(+)1例、ANA(+)且SMA(+)2例、單純SMA(+)3例,明顯高于對照組的檢出率(ANA7.5%,AMA5%,SMA6.25%,P<0.05);未檢出LKM?! ?.2性別與自身抗體檢出率的關(guān)系見表1?! ”?性別與自身抗體檢出的關(guān)系(略) Tab1Therelat
8、ionshipbetarkersofviralhepatitis χ2=5.39,P<0.05. 3討論 盡管自身抗體在自身免疫性肝炎發(fā)病機(jī)制中的確切作用尚未得以證實,但其在診斷疾病、了解病程和觀察療效中有很重要的價值。目前,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與自身免疫性肝炎有關(guān)的自身抗體包括ANA、SMA、抗骨架蛋白抗體、抗肌蛋白抗體、LKM和AMA等,其中常用的有ANA、SMA、LKM、AMA和可溶性肝抗原抗體等。依據(jù)這些抗體,不僅可以實現(xiàn)對自身免疫性肝炎的診