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《砷暴露小鼠肝組織核酸損傷免疫組織化學(xué)觀察 》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、砷暴露小鼠肝組織核酸損傷免疫組織化學(xué)觀察李秋娟，楊光，葉建新，孫鮮策，陳敏，劉曉芳，樸豐源【關(guān)鍵詞】砷；肝；8 摘要：目的為進(jìn)一步研究砷對(duì)肝臟的毒性作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為4組：1,2,4mg/L三氧化二砷染毒組和生理鹽水組，連續(xù)染毒60d，取小鼠肝組織固定，用免疫組化方法觀察肝臟組織細(xì)胞的8Nitroguanine表達(dá)。結(jié)果染砷組小鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)抗8Nitroguanine免疫染色陽(yáng)性反應(yīng)，并隨著砷暴露劑量的增加而呈現(xiàn)明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系。結(jié)論慢性低劑量砷暴露可誘發(fā)小鼠肝細(xì)胞8Nitroguanine的高表達(dá)，提示8硝基鳥(niǎo)嘌呤核苷(8Nitr
2、oguanine)可以作為砷對(duì)肝細(xì)胞毒性作用的早期敏感生物標(biāo)志物?！ ￡P(guān)鍵詞：砷；肝；8Nitroguanine；免疫組化；核酸損傷 Observationonnucleicaciddamageofliverinmiceexposedtoarsenicinlomunohistochemistry DepartmentofHygiene,DalianMedicalUniversity(Dalian116027,China)Abstract：ObjectiveToprovideevidenceforexploringthemechanismofarsenicinduced
3、hepatoxicity.MethodsFortymiceentalgroups(1mg/LAs2O3,2mg/LAs2O3and4mg/LAS2O3).As2O3inisteredfor60days.Immunohistochemistrymethodice.ResultsExpressionof8Nitroguanineiceexposedtoarsenicandthereice.8Nitroguaninemightbeanearliersensitivebio-markerforarsenictoxicitytoliver. Keymunohistochemist
4、ry；nucleicacid 近年來(lái)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人群流行病學(xué)調(diào)查均表明，砷可引起不同程度的肝損傷、肝纖維化、肝硬化及肝癌〔1-3〕。研究表明，砷可影響體內(nèi)氧化還原平衡，增高肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化水平，降低谷胱甘肽(GSH)濃度和抗氧化酶活性，使肝組織受到自由基損害〔4，5〕。但是，其機(jī)制目前尚不十分清楚。本研究以小鼠為研究對(duì)象，以8Nitroguanine作為生物標(biāo)志物，通過(guò)免疫組化方法，觀察砷對(duì)肝組織細(xì)胞核酸的損傷作用，為探討砷的肝臟組織毒性作用機(jī)制提供依據(jù)?！ ?材料與方法 11材料抗8-硝基鳥(niǎo)嘌呤單克隆抗體(日本島津公司)；UltraSensitiveTMSP超敏試劑
5、盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）；其他試劑均為分析純。 12方法 121動(dòng)物處理成熟健康昆明種小鼠40只，雌雄各半(大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。按體重隨機(jī)分為4組：1,2,4mg/L的三氧化二砷(As2O3)染毒組和生理鹽水對(duì)照組。小鼠通過(guò)自然飲用含As2O3自來(lái)水方式染毒，每天測(cè)定水消耗量。連續(xù)染毒60d后，斷頭處死并立即取肝組織固定?！ ?22肝組織形態(tài)學(xué)觀察(圖1)肝組織經(jīng)福爾馬林固定后，常規(guī)石蠟包埋，5μm連續(xù)切片，在65℃溫箱中烤片60min；蘇木素伊紅(HE)染色，光鏡下進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察?！ ?23肝組織免疫組織化學(xué)觀
6、察按照免疫組化染色法(SP)〔5〕，在肝組織切片上滴1∶300稀釋的鼠抗人8Nitroguanine單克隆抗體，在4℃條件下孵育過(guò)夜，然后按UltraSensitiveTMSP超敏試劑盒的步驟進(jìn)行，經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，HE復(fù)染細(xì)胞核，自來(lái)水沖洗返藍(lán)。常規(guī)脫水、透明，中性樹(shù)膠封片。閱片時(shí)，先觀察整張切片，再隨機(jī)選擇不同區(qū)域的5個(gè)高倍視野，顯微鏡下拍照，并應(yīng)用圖象分析軟件對(duì)8Nitroguanine表達(dá)的平均吸光度進(jìn)行定量的分析(Imageproplus45)?！ ?3統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS115軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用Scheff'stest方法進(jìn)行組間均數(shù)比較，以P0
7、05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！ ?結(jié)果 21肝組織病理學(xué)觀察(圖1)肝組織形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，對(duì)照組肝細(xì)胞核膜完整，核仁清晰，胞漿正常(圖1A)。而染砷組肝臟細(xì)胞腫脹，胞漿出現(xiàn)空泡狀改變，細(xì)胞核固縮、碎裂或溶解，肝組織有明顯的病理改變(圖1B)?！ D1小鼠肝組織SP觀察結(jié)果(HE，×200)（略） 22肝組織細(xì)胞核酸損傷的免疫組織化學(xué)觀察(圖2)小鼠肝組織抗8Nitroguanine的免疫組化結(jié)果顯示，染砷組小鼠肝組織細(xì)胞中靠近細(xì)胞膜的胞漿被染成棕褐色(圖2B,C,D)，呈現(xiàn)明顯的抗8Nitroguanine陽(yáng)性反應(yīng)，而對(duì)照組
