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1、金標(biāo)法乙肝表面抗原檢測(cè)方法學(xué)探討【摘要】通過(guò)從靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性等四個(gè)方面對(duì)金標(biāo)乙肝表面抗原檢測(cè)法進(jìn)行方法學(xué)探討，并分別用金標(biāo)法及酶免疫法對(duì)1200例體檢及臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)金標(biāo)法檢測(cè)血清中乙肝表面抗原特異性強(qiáng)，靈敏度高，與酶免疫法符合率為99.0%，且無(wú)需特殊儀器設(shè)備，簡(jiǎn)便快速，具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。【關(guān)鍵詞】金標(biāo)法；乙肝表面抗原乙肝表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒外殼蛋白中的主要成分陽(yáng)性是感染乙肝病毒的標(biāo)志，是檢查乙肝血清標(biāo)志物中較重要的一項(xiàng)〔1〕。近年來(lái)發(fā)展的金標(biāo)法檢測(cè)HBsAg，與傳統(tǒng)的酶免疫法（EIA）相比，具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，不
2、需要儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，能滿(mǎn)足臨床急診快速出結(jié)果的需要，且較適合使用于流行病學(xué)調(diào)查，應(yīng)用前景非常寬廣。1材料與方法1.1材料（1）金標(biāo)試紙條：上海洪泰生物技術(shù)發(fā)展有限公司產(chǎn)品。（2）HBsAg靈敏度標(biāo)準(zhǔn)參比品：中國(guó)藥品生物制品檢定所產(chǎn)品。（3）HBsAg酶免疫診斷試劑盒，HBsAg、HBcAg、HBeAg陽(yáng)性對(duì)照血清：中外合資上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。（4）血清標(biāo)本：1200份體檢及臨床血清標(biāo)本，其中乙型肝炎患者血清172份，健康人血清1028份。1.2方法（1）5ng/ml標(biāo)準(zhǔn)參比品用生理鹽水分別稀釋成4ng/ml,3ng/ml,2ng/ml,1ng/
3、ml幾種濃度，各取0.1～0.2ml置于潔凈試管中，用金標(biāo)法試紙條進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)所述，將測(cè)試條有金標(biāo)抗體端插入血清內(nèi)，放置一定時(shí)間后觀察結(jié)果。（2）HBsAg、HBcAg、HBeAg陽(yáng)性對(duì)照血清各取3份，每份為0.1～0.2ml加入已備好潔凈試管中，用金標(biāo)法對(duì)各份血清進(jìn)行檢測(cè)。（3）分別用金標(biāo)法、EIA法對(duì)1200份體檢及臨床血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。（4）將金標(biāo)試紙條各10條分置于37℃、室溫（25℃）保存5天，做熱穩(wěn)定試驗(yàn)。2結(jié)果（1）用金標(biāo)法對(duì)5種濃度的HBsAg陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)參比品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果確定時(shí)間：強(qiáng)陽(yáng)性參比品（4～5ng/ml）在2min內(nèi)即可在
4、檢測(cè)線見(jiàn)到紅色膠體金顆粒聚集；陽(yáng)性參比品（3mg/ml）在5min內(nèi)即可出現(xiàn)兩條紫紅色線條，弱陽(yáng)性標(biāo)本（1～2ng/ml）約需20min確定結(jié)果。說(shuō)明了金標(biāo)法敏感性較強(qiáng)，靈敏度可達(dá)1ng/ml，可以滿(mǎn)足臨床要求。（2）將金標(biāo)試紙條分別插入HBsAg、HBcAg、HBeAg陽(yáng)性對(duì)照血清各3份中，結(jié)果只有HBsAg陽(yáng)性對(duì)照血清管中試紙條出現(xiàn)兩條紅色線，說(shuō)明該試紙條只與HBsAg有特異性反應(yīng)，特異性強(qiáng)，不易出現(xiàn)假陽(yáng)性。（3）分別用金標(biāo)法、EIA法對(duì)1200份體檢及臨床血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果顯示：金標(biāo)法與EIA法所做結(jié)果有162例陽(yáng)性結(jié)果一致，有1026例陰性結(jié)
5、果一致，有12份血清兩法檢測(cè)結(jié)果不符，比較兩法檢測(cè)HBsAg的一致性，符合率為99.0%。12份兩法結(jié)果不符的血清中，有5例（乙肝組3份，健康組2份）金標(biāo)法呈弱陽(yáng)性，而EIA陰性，但這5份血清EIA吸光度值均接近臨界值。另7例（均為乙肝組血清）金標(biāo)法陰性，EIA為HBsAg弱陽(yáng)性。通過(guò)計(jì)算，可得出金標(biāo)法臨床靈敏度為95.9%，臨床特異性為99.8%，臨床準(zhǔn)確度為99.2%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)率為98.8%。（4）將金標(biāo)法試紙于37℃、25℃各10條放置5天后，測(cè)定10份不同血清標(biāo)本（乙肝組與健康組各5例），所得結(jié)果與放置4℃的試紙檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差別。說(shuō)明金標(biāo)法試紙條性
6、質(zhì)較穩(wěn)定，易保存。3討論HBsAg的檢測(cè)可作為乙型肝炎病毒感染的一個(gè)重要指標(biāo)，目前多采用EIA或EIA一步法，由于其試劑盒中酶標(biāo)試劑不易保存，操作中需通過(guò)加樣、加試劑、孵育、洗板等一系列過(guò)程，延時(shí)長(zhǎng)，且易引起標(biāo)本間交叉污染或陽(yáng)性標(biāo)本對(duì)人體的污染，給實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作帶來(lái)一些不便，不能滿(mǎn)足臨床急診快速出結(jié)果的要求。近年來(lái)，隨著現(xiàn)代免疫化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了膠體金免疫層析法〔2〕。該法是將羊抗HBs、羊抗鼠IgG分別固定在特制的纖維素試帶上并呈兩條線上下排列，羊抗鼠IgG線在試帶條上方為陰性對(duì)照，抗HBs在下方為測(cè)定。試帶條中含均勻分布的膠體金-抗HBs和無(wú)關(guān)的金標(biāo)
7、記鼠IgG。檢測(cè)時(shí)血清沿試帶上行，其中HBsAg在上行過(guò)程中與膠體金-抗HBs結(jié)合，待行至羊抗HBs線時(shí)，形成金標(biāo)記抗HBs-HBsAg-抗HBs復(fù)合物而在試帶上顯紅色線，試帶上無(wú)關(guān)的金標(biāo)鼠IgG隨血清繼續(xù)上行至羊抗鼠IgG處時(shí)形成紅色金標(biāo)復(fù)合物為陰性對(duì)照。判斷結(jié)果時(shí)，出現(xiàn)兩條紅色線時(shí)為陽(yáng)性，只在對(duì)照線出現(xiàn)紅色線時(shí)為陰性，如對(duì)照線未出現(xiàn)紅色，則表明該試紙條失效。該法集免疫反應(yīng)與免疫層析的特點(diǎn)，靈敏度高，特異性強(qiáng)，且試紙條輕便易帶易保存、易操作，無(wú)需儀器設(shè)備，病人標(biāo)本可隨來(lái)隨查，20min內(nèi)即可發(fā)出結(jié)果，適合于大批健康體檢、流行病學(xué)調(diào)查及門(mén)診急診標(biāo)本的應(yīng)用。當(dāng)
8、然，該法與EIA相比，只能作定性檢查，靈敏度稍差，易
