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《紅蕓豆紅細(xì)胞凝集素單體的分離純化和性質(zhì)研究 》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、紅蕓豆紅細(xì)胞凝集素單體的分離純化和性質(zhì)研究【摘要】目的研究一種從紅蕓豆中提取紅細(xì)胞凝集素單體(PHA-E)的新方法。方法紅蕓豆經(jīng)過浸提，離子交換樹脂分離，分子篩層析純化后得到PHA-E樣品。采用電泳法測定其純度、分子量和等電點(diǎn)。用2%人細(xì)胞懸液測定樣品凝集紅細(xì)胞的能力和影響凝血的因素，使用硫酸苯酚法測定其糖含量。結(jié)果經(jīng)PAGE分析PHA-E樣品為單帶電泳純，SDS-PAGE上顯示亞基分子量為32kD，等電點(diǎn)為6.5.樣品使人紅細(xì)胞50%凝集的蛋白質(zhì)最低濃度為4μg/ml左右。單糖不影響PHA-E凝血活力，EDTA抑制其
2、凝血活力，Zn2+促進(jìn)其凝血。糖含量為8.1%.【關(guān)鍵詞】紅細(xì)胞凝集素分離純化凝血性質(zhì)研究Abstract：ObjectiveTostudyaneethodforErythrohemagglutinin（PHA-E）productionfromPhaseolusvulgaris.MethodsPHA-EtheexcellentseedsofPhaseolusvulgarisbyextraction，ionexchangechromatographyandfinalgelfiltrationchromatography.
3、Thepurity,themolecularinedbyelectrophoresis.Theabilityandtheinfluencingfactorofagglutinationinedby2%erythrocytesofhuman.ConclusionThepurifiedPHA-Eolecularidegelelectrophoresis.IsoelectricpointofthePHA-Eoteagglutinationofhumanerythrocytesat4μg/ml,butitsactivityon
4、osaccharide.EDTAcaninhibittheabilityofagglutination,andZn2+canaccelerateit.ThesugarcontentofPHA-Eagglutinin；separationandpurification；haemagglutination；characterization植物凝集素(PhytohemagglutininPHA)是從豆科植物種子中提取的一種含糖蛋白質(zhì)〔1〕。植物凝集素具有刺激外周血淋巴細(xì)胞RNA合成和有絲分裂〔2〕，促進(jìn)免疫反應(yīng)，使細(xì)胞凝聚，
5、腫瘤細(xì)胞失活，以及誘發(fā)人外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗癌淋巴因子等生物學(xué)活性。文獻(xiàn)〔3〕報道PHA是由E、L兩種亞基組成的四聚體蛋白質(zhì)的混合物，按其亞基組成可分為L4、L3E、L2E2、LE3、E4具有相同物化性質(zhì)和不同生物學(xué)活性的同工凝集素。其中PHA-E含有4個相同的E亞基，具有最強(qiáng)的紅細(xì)胞凝集功能，沒有白細(xì)胞凝集能力。由于凝集素單體較混合物PHA對于糖鏈具有更加特異的識別能力，可以作為分子探針，研究特異細(xì)胞膜受體的分布等，在免疫學(xué)、腫瘤、生殖生理、細(xì)胞生物學(xué)等許多方面得到應(yīng)用，在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)上呈現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景。關(guān)于紅細(xì)胞
6、凝集素單體的分離純化國內(nèi)還未見報道，本研究改進(jìn)和優(yōu)化前人的提取和純化方法，簡化操作程序，從紅蕓豆中得到了凝血活力較高的電泳純紅細(xì)胞凝集素單體。1材料與方法1.1儀器與試藥UV1102紫外－可見分光光度計（上海天美科技有限公司），蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)（上海琪特儀器分析有限公司），高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司），MINI-PROTEINⅣ電泳系統(tǒng)（Bio-Rad公司）。紅蕓豆（購自甘肅蘭州），低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)（上海東風(fēng)生物技術(shù)有限公司），蛋白質(zhì)等電點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)（Pharmacia公司），兩性電解質(zhì)（pH3～9，Pharmac
7、ia公司），PHA-E（Sigma公司），DEAE-SepharoseFF、CM-SepharoseFF、SephadexG100（Pharmarica公司），乙酰氨基葡萄糖（Sigma公司），人紅細(xì)胞懸液由本實(shí)驗(yàn)室自制，其它試劑均為國產(chǎn)分析純。1.2PHA-E提取過程1.2.1PHA-E粗提液制備將紅蕓豆粉碎，取100g粉末，加入1000ml的NaAc-HAc緩沖液(pH5.2，20mmol/L,0.14mol/LNaCl),分四次磁力攪拌浸取。合并浸取液，后用兩層紗布過濾。收集濾液，調(diào)pH5.2，在4℃下10000
8、rpm離心10min，取上清液，即得PHA-E粗提液。1.2.2CM-Sepharose層析取CM-Sepharose裝柱(2.6cm×20cm)，用NaAc-HAc緩沖液（pH5.2，20mmol/L）平衡，將收集的PHA-E粗提液上柱。用Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液（pH6.0，20mmol/L）沖洗至沒有蛋白質(zhì)流出，
