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《外治法對實驗性兔膝骨性關節(jié)炎滑膜中bfgf表達的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、外治法對實驗性兔膝骨性關節(jié)炎滑膜中bFGF表達的影響論文摘要：目的：了解外治法對堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）在實驗性兔膝骨性關節(jié)炎滑膜中的表達分布情況的影響，探討中醫(yī)外治法治療骨性關節(jié)炎的機理。方法：32只實驗動物隨機分為正常組、模型組、扶他林組和外治法組，采用股靜脈結扎方法造模成功后，治療1個月。用免疫組化SABC方法對實驗動物膝關節(jié)滑膜bFGF的表達分布進行觀察。結果：造模組24只動物膝關節(jié)滑膜中bFGF免疫組化陽性率為92%（22/24），且外治法組表達強于扶他林組和模型組。正常組8只動物的膝關節(jié)滑膜中免疫組化為陰性。結論：外治法能夠促進實驗動
2、物膝關節(jié)滑膜bFGF的表達，從而為外治法治療骨性關節(jié)炎在細胞因子水平提供理論依據(jù)。關鍵詞：骨性關節(jié)炎；外治法；堿性成纖維細胞生長因子；滑膜骨性關節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種慢性關節(jié)病，又稱退行性關節(jié)病、增生性關節(jié)病等。其特征是關節(jié)軟骨發(fā)生原發(fā)性或繼發(fā)性退行性變，并在關節(jié)邊緣有骨贅形成。本病的病理變化以關節(jié)軟骨變性及軟骨下骨質病變?yōu)橹鳌Ｖ嗅t(yī)外治法治療OA有顯著療效1-2。堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）能夠誘導外胚層和中胚層來源的細胞增殖和分化.freelg/kg劑量進行耳緣靜脈麻醉。麻醉滿意后將家兔仰臥固定于兔臺上，四肢伸直。所有實驗
3、動物均取右側下肢造模。右側股根部備皮、消毒，無菌條件下操作，用手指觸及腹股溝股動脈搏動處并以此為中心，做2cm縱行切口，切開皮膚、皮下組織，暴露股神經(jīng)血管束，分離股靜脈并進行雙重結扎，在兩道結扎線間將股靜脈剪斷，縫合皮膚及皮下組織。術后每天肌注青霉素20萬U/只，共7d，以預防感染。2.2分組及處理32只白兔隨機分為正常組、模型組、扶他林組和外治法組，每組8只。正常組不做任何特殊處理。模型組造模成功后正常喂養(yǎng)，自由活動。扶他林組用扶他林乳膠劑在患膝周圍涂抹均勻，輕揉3~5min。外治法組則用中藥熏蒸配合手法彈撥以及電刺激，每次熏蒸30min，手法彈撥20m
4、in，以膝關節(jié)周圍及股后側及小腿后側肌肉為主，配合伸膝關節(jié)。電刺激采用G6805-1型針灸治療儀，配用自制電極，主要刺激兔股前側及小腿后側肌肉及膝周穴位，引起兔患膝被動屈伸達40°～50°為宜，主要以屈曲為主。以上兩組均造模成功、自由喂養(yǎng)8周后分別開始治療。治療4周后處死動物取標本，標本取出后用10%多聚甲醛固定，行石蠟切片。模型組和正常組均在相應時間處死，取標本做石蠟切片。2.3檢測方法石蠟切片常規(guī)脫蠟，3%的雙氧水室溫5～10min滅活內源性酶?？乖瓱嵝迯?。滴加5%BSA封閉液，20min(室溫下)。加入稀釋的bFGF一抗，1h(37℃)。加入生物素標
5、記的羊抗兔二抗，鏈霉親合素生物素過氧化酶溶液與DAB液，室溫顯色，鏡下控制反應時間。蘇木素復染封片觀察。其間每個步驟均用PBS沖洗5min3次。結果判定：在400倍高倍鏡下觀察細胞內外有無染色，未著色為陰性，淺棕黃色為弱陽性，中等棕黃色為陽性，深棕黃色為強陽性。2.4統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差(±ｓ)表示，組間差異比較采用q檢驗，所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行分析。3結果正常組免疫組化染色為陰性；模型組僅有部分細胞因子反應陽性，部分為弱陽性，胞漿中有黃褐色的斑塊狀陽性物質分布，但量較少，大部分細胞無著色，外治法組和扶他林組與正常組相比有所
6、不同，胞漿中陽性物質數(shù)量增多，陽性細胞增加。在400倍光鏡下每組選取10個典型視野，采用同濟醫(yī)科大學免疫組化實驗室HMIAS-2000型全自動醫(yī)學彩色圖像分析系統(tǒng)進行分析。具體結果見表1。表1各組bFGF平均光度均值的比較(略)注:與外治法組比較*P＜0.05，**P＜0.014討論bFGF最早由牛的腦垂體中提取，是由146個氨基酸組成的活性物質，它對中胚層來源的細胞有明顯的促有絲分裂作用4。它的生物學功能有以下幾個方面：促進新生血管形成;促進軟組織損傷修復;促進骨、軟骨組織損傷修復?，F(xiàn)已證實在人體和動物實驗中bFGF關節(jié)內注射對軟骨細胞的再生修復有很好的
7、促進作用5。實驗研究表明bFGF對體外培養(yǎng)的兔軟骨細胞促進膠原合成和維持軟骨細胞表型有重要作用6。并認為可能與以下作用有關：增加細胞匯合生長時細胞的量；增加軟骨細胞蛋白多糖和膠原合成，可使高分子蛋白多糖和Ⅱ型膠原含量增高；可阻滯軟骨細胞的分化；可使衰老或退變的軟骨細胞反分化而使其表型接近正常細胞。徐衛(wèi)東等7通過觀察bFGF對培養(yǎng)兔關節(jié)軟骨細胞基質及轉化生長因子β1(TGFβ1)表達的影響，結果發(fā)現(xiàn)bFGF能明顯促進膠原和蛋白多糖的合成，并與劑量、時間成正相關，能促進關節(jié)軟骨TGFβ1的表達，從而推遲了關節(jié)軟骨細胞的成熟，維持細胞的軟骨表現(xiàn)型。本實驗中采用股
8、靜脈結扎的造模方法，比較接近OA早期的病理改變。OA在中醫(yī)屬“痹證
