脫細(xì)胞真皮基質(zhì)分析實施報告

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1、完美WORD格式.整理前言大面積深度燒傷或其他創(chuàng)傷導(dǎo)致皮膚真皮成分缺損，通過刃厚小皮片或微粒植皮技術(shù)雖然能使創(chuàng)面愈合，但由于其缺乏真皮層，導(dǎo)致愈合后創(chuàng)面彈性差，凸凹不平，易攣縮且不耐摩擦。移植自體皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法，但大面積深度燒傷后，能作為供皮區(qū)的部位已很少，供皮區(qū)又將形成同等程度的缺損，日后形成瘢痕。為解決這一問題，國內(nèi)外學(xué)者致力于尋找一種理想的真皮替代品。1.脫細(xì)胞真皮基質(zhì)概述脫細(xì)胞真皮基質(zhì)（acellulardermalmatrixADM）是用物理、化學(xué)等方法將人或動物皮膚中的表皮層及細(xì)胞成分徹底去除僅保留真皮中含膠原網(wǎng)架的細(xì)胞外基質(zhì)。脫細(xì)胞真皮

2、基質(zhì)由于完全沒有了細(xì)胞成分和Ⅰ、Ⅱ型細(xì)胞相容性抗原的主要免疫活性,故一般不會誘發(fā)排斥反應(yīng)。但脫細(xì)胞真皮基質(zhì)保留有正常膠原的三維結(jié)構(gòu)和真皮中含膠原支架的細(xì)胞外基質(zhì)能為組織細(xì)胞的再生提供一個良好的支架結(jié)構(gòu)，具有創(chuàng)面覆蓋、組織缺損填充、引導(dǎo)組織再生和支架等作用。脫細(xì)胞真皮基質(zhì)中無細(xì)胞成分,免疫活性低,不會誘發(fā)免疫反應(yīng)。它保留了表皮和真皮間的基底膜,移植后可形成真皮面和基底膜面。基底膜面可支持?jǐn)鄬悠て纳L,這對表皮細(xì)胞的增殖分化以及移植皮的外觀和功能起著重要作用,同時也有利于種子細(xì)胞的點附增殖等。真皮面利于脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的快速血管化,為成纖維細(xì)胞的增殖提供支架,有助于膠原成分改

3、建,促使成纖維細(xì)胞排列分布規(guī)則,形成結(jié)構(gòu)形態(tài)正常的膠原纖維,此外,還有誘導(dǎo)、調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞和新生血管長入,促進(jìn)上皮形成等作用。此外,細(xì)胞外基質(zhì)蛋白也可以促進(jìn)表皮細(xì)胞的再生。因此,脫細(xì)胞真皮基質(zhì)可作為真皮替代品,在為燒傷創(chuàng)面提供真皮的同時,可明顯減少瘢痕形成。是一種理想的真皮替代材料。1.1脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法根據(jù)來源的不同脫細(xì)胞真皮基質(zhì)分為異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)（來源主要為尸體皮）和異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)（來源為動物皮以豬皮和牛皮為主）兩種。制備過程都是盡可能的去除具有抗原性的細(xì)胞(表皮細(xì)胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中.專業(yè)資料分享.完美WORD格式.整理血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)

4、胞等),保留完整的膠原纖維成分和組織基本結(jié)構(gòu)。早期人們曾利用反復(fù)凍融法、胰酶消化法等制備ADM，但由于這些方法不能完全去除真皮內(nèi)細(xì)胞成分,導(dǎo)致ADM移植后引起宿主強烈的排異反應(yīng),而且制備過程也過于復(fù)雜,因而并未廣泛開展。目前ADM的制備方法主要有DispaseII-Triton法、高滲鹽-SDS法、高滲鹽-酶消化法、NaOH消蝕法等。只要條件控制適度,這些方法均可制備出合乎條件的ADMDispaseII-Triton法　皮膚標(biāo)本先經(jīng)DispaseII處理(2.5U/ml溶液,4℃下作用48h),再經(jīng)TritonX2100處理(0.5%溶液,室溫下作用48h)可將皮膚中的細(xì)

5、胞徹底脫除。DispaseII主要分解IV型膠原和纖維粘蛋白,能裂解基底膜中的致密層。DispaseII是一種快速有效的分離表皮與真皮的酶。標(biāo)本經(jīng)DispaseII處理后,表皮真皮間的基底膜及皮膚附屬器官周圍結(jié)締組織成分均被破壞。DispaseII同時也破壞了纖維細(xì)胞和結(jié)締組織基質(zhì)間的連結(jié),更有利于TritonX2100的浸透。TritonX2100屬于非離子型表面活性劑,在溶液中穩(wěn)定性高,不易受強電解質(zhì)無機鹽存在的影響,能與生物膜中的磷脂等脂質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物,溶解于溶液中。同時,TritonX2100中的疏水端也能和膜蛋白破壞生物膜,從而使細(xì)胞溶解破壞。該方法細(xì)胞脫除徹

6、底,但同時基底膜結(jié)構(gòu)破壞大,不利于上皮細(xì)胞底黏附生長。高滲鹽-SDS法　皮膚標(biāo)本先經(jīng)高滲鹽作用(1mol/LNaCl溶液,37℃下作用24h)使錨著細(xì)絲與表皮基底細(xì)胞的半橋粒分離,從而完整地去除表皮。然后在未改變膠原結(jié)構(gòu)的情況下,再用破膜劑十二烷基硫酸鈉(0.5%SDS溶液,室溫下作用1h)將皮膚標(biāo)本中的細(xì)胞脫除。該方法細(xì)胞脫除也比較徹底,基底膜完整保留,但真皮中Ⅳ型膠原、纖維結(jié)合素、彈力素、HLA-DR等含量較多,因此具有相對高的抗原性。高滲鹽-NaOH消蝕法　該方法利用高滲鹽(1mol/LNaCl溶液,37℃下作用24h)去除表皮，同時再利用NaOH(低濃度溶液,室溫

7、下作用18h)中堿離子的吸水作用奪取組織細(xì)胞的水分,使細(xì)胞脫水而死亡;最后使用超聲清洗儀清洗除去細(xì)胞。該方法細(xì)胞徹底脫除,膠原纖維結(jié)構(gòu)完整,排列較正常松散。但要注意控制NaOH的作用時間,如果過長(如:36h)會使膠原變性,蛋白裂解,得到的是真皮皮漿。.專業(yè)資料分享.完美WORD格式.整理酶消化-去垢劑法　該方法用胰蛋白酶(0.25%溶液,4℃下作用24h),接著用TritonX2100(0.1%溶液,室溫下作用8h),最后用Dispase(560units/L,4℃下作用24h)。Ray等[7]使用胰蛋白酶(0.25%溶液,