【9A文】脫細胞真皮基質(zhì)分析報告

《【9A文】脫細胞真皮基質(zhì)分析報告》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在應用文檔-天天文庫。

1、【MeiWei_81重點借鑒文檔】前言大面積深度燒傷或其他創(chuàng)傷導致皮膚真皮成分缺損，通過刃厚小皮片或微粒植皮技術雖然能使創(chuàng)面愈合，但由于其缺乏真皮層，導致愈合后創(chuàng)面彈性差，凸凹不平，易攣縮且不耐摩擦。移植自體皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法，但大面積深度燒傷后，能作為供皮區(qū)的部位已很少，供皮區(qū)又將形成同等程度的缺損，日后形成瘢痕。為解決這一問題，國內(nèi)外學者致力于尋找一種理想的真皮替代品。1.脫細胞真皮基質(zhì)概述脫細胞真皮基質(zhì)（acellulardermalmatriRADM）是用物理、化學等方法將人或動物皮膚中的表皮層及細胞成分徹底去除僅保留真皮中含膠原網(wǎng)架的細胞外基質(zhì)。脫細胞真

2、皮基質(zhì)由于完全沒有了細胞成分和Ⅰ、Ⅱ型細胞相容性抗原的主要免疫活性,故一般不會誘發(fā)排斥反應。但脫細胞真皮基質(zhì)保留有正常膠原的三維結(jié)構和真皮中含膠原支架的細胞外基質(zhì)能為組織細胞的再生提供一個良好的支架結(jié)構，具有創(chuàng)面覆蓋、組織缺損填充、引導組織再生和支架等作用。脫細胞真皮基質(zhì)中無細胞成分,免疫活性低,不會誘發(fā)免疫反應。它保留了表皮和真皮間的基底膜,移植后可形成真皮面和基底膜面。基底膜面可支持斷層皮片的生長,這對表皮細胞的增殖分化以及移植皮的外觀和功能起著重要作用,同時也有利于種子細胞的點附增殖等。真皮面利于脫細胞真皮基質(zhì)的快速血管化,為成纖維細胞的增殖提供支架,有助于膠原成分改建,促使

3、成纖維細胞排列分布規(guī)則,形成結(jié)構形態(tài)正常的膠原纖維,此外,還有誘導、調(diào)節(jié)宿主細胞和新生血管長入,促進上皮形成等作用。此外,細胞外基質(zhì)蛋白也可以促進表皮細胞的再生。因此,脫細胞真皮基質(zhì)可作為真皮替代品,在為燒傷創(chuàng)面提供真皮的同時,可明顯減少瘢痕形成。是一種理想的真皮替代材料。1.1脫細胞真皮基質(zhì)的制備方法根據(jù)來源的不同脫細胞真皮基質(zhì)分為異體脫細胞真皮基質(zhì)（來源主要為尸體皮）和異種脫細胞真皮基質(zhì)（來源為動物皮以豬皮和牛皮為主）兩種。制備過程都是盡可能的去除具有抗原性的細胞(表皮細胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞等),保留完整的膠原纖維成分和組織基本結(jié)構。早期【Me

4、iWei_81重點借鑒文檔】【MeiWei_81重點借鑒文檔】人們曾利用反復凍融法、胰酶消化法等制備ADM，但由于這些方法不能完全去除真皮內(nèi)細胞成分,導致ADM移植后引起宿主強烈的排異反應,而且制備過程也過于復雜,因而并未廣泛開展。目前ADM的制備方法主要有DispaseII-Triton法、高滲鹽-SDS法、高滲鹽-酶消化法、NaOH消蝕法等。只要條件控制適度,這些方法均可制備出合乎條件的ADMDispaseII-Triton法　皮膚標本先經(jīng)DispaseII處理(2.5U/ml溶液,4℃下作用48h),再經(jīng)TritonR2100處理(0.5%溶液,室溫下作用48h)可將皮膚中的

5、細胞徹底脫除。DispaseII主要分解IV型膠原和纖維粘蛋白,能裂解基底膜中的致密層。DispaseII是一種快速有效的分離表皮與真皮的酶。標本經(jīng)DispaseII處理后,表皮真皮間的基底膜及皮膚附屬器官周圍結(jié)締組織成分均被破壞。DispaseII同時也破壞了纖維細胞和結(jié)締組織基質(zhì)間的連結(jié),更有利于TritonR2100的浸透。TritonR2100屬于非離子型表面活性劑,在溶液中穩(wěn)定性高,不易受強電解質(zhì)無機鹽存在的影響,能與生物膜中的磷脂等脂質(zhì)結(jié)合形成復合物,溶解于溶液中。同時,TritonR2100中的疏水端也能和膜蛋白破壞生物膜,從而使細胞溶解破壞。該方法細胞脫除徹底,但同

6、時基底膜結(jié)構破壞大,不利于上皮細胞底黏附生長。高滲鹽-SDS法　皮膚標本先經(jīng)高滲鹽作用(1mol/LNaCl溶液,37℃下作用24h)使錨著細絲與表皮基底細胞的半橋粒分離,從而完整地去除表皮。然后在未改變膠原結(jié)構的情況下,再用破膜劑十二烷基硫酸鈉(0.5%SDS溶液,室溫下作用1h)將皮膚標本中的細胞脫除。該方法細胞脫除也比較徹底,基底膜完整保留,但真皮中Ⅳ型膠原、纖維結(jié)合素、彈力素、HLA-DR等含量較多,因此具有相對高的抗原性。高滲鹽-NaOH消蝕法　該方法利用高滲鹽(1mol/LNaCl溶液,37℃下作用24h)去除表皮，同時再利用NaOH(低濃度溶液,室溫下作用18h)中堿

7、離子的吸水作用奪取組織細胞的水分,使細胞脫水而死亡;最后使用超聲清洗儀清洗除去細胞。該方法細胞徹底脫除,膠原纖維結(jié)構完整,排列較正常松散。但要注意控制NaOH的作用時間,如果過長(如:36h)會使膠原變性,蛋白裂解,得到的是真皮皮漿。酶消化-去垢劑法　該方法用胰蛋白酶(0.25%溶液,4℃下作用24h),接著用TritonR2100(0.1%【MeiWei_81重點借鑒文檔】【MeiWei_81重點借鑒文檔】溶液,室溫下作用8h),最后用Dispase(560unit