糖尿病大鼠椎間盤退變的實驗觀察論文

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1、糖尿病大鼠椎間盤退變的實驗觀察論文陳森熊敏余化龍何寧廖梅梅【摘要】目的觀察糖尿病大鼠椎間盤的退變情況，探討糖尿病引起椎間盤退變的可能機制。方法30只雄性SD大鼠隨機分為實驗組和對照組，每組15只。實驗組采用腹腔單次注射鏈脲佐菌素溶液(STZ)50mg/kg制成糖尿病模型，正常對照組僅注射等量的枸櫞酸緩沖液。分別在建模成功后4、8、12mol/L〔(20.27±2.600)mmol/L〕。在不同的階段，實驗組椎間盤的退變程度均較重.freelechanism.MethodsThirty3monthsoldmaleSDratslydividedintoexperimentandcontrolgro

2、ups(n=15).Diabetesmelliums(DM)modelg/kg).Theratsbardiscinedbytransmissionelectronmicroscope.Thenucleuspulposusapoptosiseasuredbyimmunohistochemistry.ResultsThevenousfastingbloodglucoselevelsofallmodelratsmol/L〔(20.27±2.600)mmol/L〕.paredtothecontrol,thepathologicandultrastructuralchangesuchmoreserio

3、us.Theapoptosisindexesofnucleuspulposusellitusmayacceleratethediscdegenerationinthediabeticrats.【Keyellitus;Intervertebraldisc;Apoptosis糖尿病是一組全身性的內分泌代謝性疾病，其慢性并發(fā)癥幾乎涉及到全身各器官組織。糖尿病微血管改變除了引起糖尿病視網膜病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病變外〔1，2〕。Ziv等人的研究〔3〕證實糖尿病會影響到椎間盤組織。Mobbs等人〔4〕報告患有糖尿病的腰椎間盤突出癥患者手術后效果的優(yōu)良率明顯低于非糖尿病患者，且術后復發(fā)率也較高，其原

4、因還不清楚。本實驗探討大鼠糖尿病和椎間盤退變之間的關系。1材料與方法1.1動物模型的制備和取材1.1.1動物模型的制備體重200～250gSD雄性大鼠30只(由武漢大學實驗動物中心提供)，隨機分為對照組15只和實驗組15只。用快速血糖儀(美國強生公司，OneTouchⅡ)測定大鼠尾靜脈血糖。禁食24h后，實驗組大鼠，腹腔單次按50mg/kg注射鏈脲佐菌素溶液(STZ，美國Sigma公司)，用枸櫞酸鈉緩沖液溶解(pH=4.5)。對照組僅給予等量枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射?？崭寡浅掷m(xù)3d≥13.8mmol/L為糖尿病大鼠模型。1.1.2實驗取材分別于造模成功后4、8、12g/kg腹腔注射麻醉，解剖后

5、迅速鉗取全段腰椎,取腰5/6椎間盤組織(包括終板、髓核和纖維環(huán))，10%甲醛固定，制成蠟塊。1.2椎間盤組織學觀察采用石蠟切片，切片厚6μm，作普通HE染色，觀察椎間盤組織形態(tài)及病理變化。1.3椎間盤超微結構觀察每組隨機取兩個椎間盤(腰2/3)，送武漢大學醫(yī)學院電鏡室常規(guī)制樣，用透射電子顯微鏡觀察終板微血管內皮細胞形態(tài)及椎間盤的相關結構。1.4髓核細胞凋亡率的測定末端脫氧核糖核酸轉移酶介導的缺口末端標記法(TUNEL)檢測細胞凋亡：具體操作按照試劑盒說明進行。細胞中有棕黃色顆粒者為陽性凋亡細胞，每張切片各選擇5個視野，在高倍鏡下(10×40)計算凋亡細胞細胞數占細胞總數的百分比，得出髓核細胞凋

6、亡率，組間比較。1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數據處理，數據以x±s表示，使用t檢驗。2結果2.1大鼠的血糖測定兩組大鼠在注射STZ溶液前后，血糖分別為：注射前對照組(5.21±0.696)，實驗組(5.31±0.519);注射后對照組(5.13±0.464)，實驗組(20.27±2.6)其血糖水平差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.2椎間盤的病理變化組織學表現：對照組4的薄層骨質，這一結構也具有相當大的通透性，終板下的血管網襻非常豐富，血管數目以中央區(qū)最多周圍較少，比例約2.5∶1，血管網襻發(fā)出分支通過孔狀結構進入軟骨終板內形成血管芽狀結構〔8～10〕。Crock等〔11〕

7、發(fā)現由椎體骨髓腔血竇發(fā)出的血管芽可深入終板。血管芽結構是椎間盤髓核組織的重要營養(yǎng)通路。微血管病變作為糖尿病的特征性并發(fā)癥，是多種器官損害的病理生理基礎，其主要改變?yōu)槊氀芑啄ぴ龊?，微血管屏障功能破壞及進行性閉塞，組織缺氧。糖尿病微血管改變除了引起糖尿病視網膜病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病變外，Ziv等人的研究證實這種病變也會影響到椎間盤組織〔1～3〕。糖尿病時，在高血糖和糖基化終末產物等因素的