糖尿病大鼠椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)觀察

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1、糖尿病大鼠椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)觀察作者：陳森熊敏余化龍何寧廖梅梅【摘要】目的觀察糖尿病大鼠椎間盤的退變情況，探討糖尿病引起椎間盤退變的可能機(jī)制。方法30只雄性SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組15只。實(shí)驗(yàn)組采用腹腔單次注射鏈脲佐菌素溶液(STZ)50mg/kg制成糖尿病模型，正常對(duì)照組僅注射等量的枸櫞酸緩沖液。分別在建模成功后4、8、12mol/L〔(20.27±2.600)mmol/L〕。在不同的階段，實(shí)驗(yàn)組椎間盤的退變程度均較重，髓核細(xì)胞凋亡率較高。結(jié)論糖尿病是影響椎間盤退變的因素之一?！娟P(guān)鍵詞】糖尿病;椎間盤;凋亡　　【A

2、bstract】ObjectiveToobservethechangesofintervertebraldiscdegenerationofdiabetesratsandexploreitspossiblemechanism.MethodsThirty3monthsoldmaleSDratslydividedintoexperimentandcontrolgroups(n=15).Diabetesmelliums(DM)modelg/kg).Theratsbardiscinedbytransmissionelectronmic

3、roscope.Thenucleuspulposusapoptosiseasuredbyimmunohistochemistry.ResultsThevenousfastingbloodglucoselevelsofallmodelratsmol/L〔(20.27±2.600)mmol/L〕.paredtothecontrol,thepathologicandultrastructuralchangesuchmoreserious.Theapoptosisindexesofnucleuspulposusellitusmaya

4、cceleratethediscdegenerationinthediabeticrats.　　【Keyellitus;Intervertebraldisc;Apoptosis　　糖尿病是一組全身性的內(nèi)分泌代謝性疾病，其慢性并發(fā)癥幾乎涉及到全身各器官組織。糖尿病微血管改變除了引起糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病變外〔1，2〕。Ziv等人的研究〔3〕證實(shí)糖尿病會(huì)影響到椎間盤組織。Mobbs等人〔4〕報(bào)告患有糖尿病的腰椎間盤突出癥患者手術(shù)后效果的優(yōu)良率明顯低于非糖尿病患者，且術(shù)后復(fù)發(fā)率也較高，其原因還不清楚。本實(shí)驗(yàn)探討大

5、鼠糖尿病和椎間盤退變之間的關(guān)系。　　1材料與方法　　1.1動(dòng)物模型的制備和取材　　1.1.1動(dòng)物模型的制備體重200～250gSD雄性大鼠30只(由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)分為對(duì)照組15只和實(shí)驗(yàn)組15只。用快速血糖儀(美國(guó)強(qiáng)生公司，OneTouchⅡ)測(cè)定大鼠尾靜脈血糖。禁食24h后，實(shí)驗(yàn)組大鼠，腹腔單次按50mg/kg注射鏈脲佐菌素溶液(STZ，美國(guó)Sigma公司)，用枸櫞酸鈉緩沖液溶解(pH=4.5)。對(duì)照組僅給予等量枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射?？崭寡浅掷m(xù)3d≥13.8mmol/L為糖尿病大鼠模型?！　?.1.2實(shí)驗(yàn)

6、取材分別于造模成功后4、8、12g/kg腹腔注射麻醉，解剖后迅速鉗取全段腰椎,取腰5/6椎間盤組織(包括終板、髓核和纖維環(huán))，10%甲醛固定，制成蠟塊?！　?.2椎間盤組織學(xué)觀察采用石蠟切片，切片厚6μm，作普通HE染色，觀察椎間盤組織形態(tài)及病理變化?！　?.3椎間盤超微結(jié)構(gòu)觀察每組隨機(jī)取兩個(gè)椎間盤(腰2/3)，送武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院電鏡室常規(guī)制樣，用透射電子顯微鏡觀察終板微血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及椎間盤的相關(guān)結(jié)構(gòu)?！　?.4髓核細(xì)胞凋亡率的測(cè)定末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡：具體操作按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)

7、行。細(xì)胞中有棕黃色顆粒者為陽(yáng)性凋亡細(xì)胞，每張切片各選擇5個(gè)視野，在高倍鏡下(10×40)計(jì)算凋亡細(xì)胞細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比，得出髓核細(xì)胞凋亡率，組間比較?！　?.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)以x±s表示，使用t檢驗(yàn)?！　?結(jié)果　　2.1大鼠的血糖測(cè)定兩組大鼠在注射STZ溶液前后，血糖分別為：注射前對(duì)照組(5.21±0.696)，實(shí)驗(yàn)組(5.31±0.519);注射后對(duì)照組(5.13±0.464)，實(shí)驗(yàn)組(20.27±2.6)其血糖水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?！　?.2椎間盤的病理

8、變化組織學(xué)表現(xiàn)：對(duì)照組4.　　圖1各組椎間盤組織病理學(xué)觀察(HE，×40)　　2.3椎間盤超微結(jié)構(gòu)觀察①對(duì)照組細(xì)胞膜完整，胞漿內(nèi)有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基體、溶酶體、線粒體等細(xì)胞器清晰可見，也可見到糖原顆粒及少量脂滴。軟骨細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞膜完整，胞漿內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較發(fā)達(dá)，可清楚見