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《糖尿病大鼠椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)觀察》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、糖尿病大鼠椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)觀察作者:陳森熊敏余化龍何寧廖梅梅【摘要】目的觀察糖尿病大鼠椎間盤的退變情況,探討糖尿病引起椎間盤退變的可能機(jī)制。方法30只雄性SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組15只。實(shí)驗(yàn)組采用腹腔單次注射鏈脲佐菌素溶液(STZ)50mg/kg制成糖尿病模型,正常對(duì)照組僅注射等量的枸櫞酸緩沖液。分別在建模成功后4、8、12mol/L〔(20.27±2.600)mmol/L〕。在不同的階段,實(shí)驗(yàn)組椎間盤的退變程度均較重,髓核細(xì)胞凋亡率較高。結(jié)論糖尿病是影響椎間盤退變的因素之一?!娟P(guān)鍵詞】糖尿病;椎間盤;凋亡 【A
2、bstract】ObjectiveToobservethechangesofintervertebraldiscdegenerationofdiabetesratsandexploreitspossiblemechanism.MethodsThirty3monthsoldmaleSDratslydividedintoexperimentandcontrolgroups(n=15).Diabetesmelliums(DM)modelg/kg).Theratsbardiscinedbytransmissionelectronmic
3、roscope.Thenucleuspulposusapoptosiseasuredbyimmunohistochemistry.ResultsThevenousfastingbloodglucoselevelsofallmodelratsmol/L〔(20.27±2.600)mmol/L〕.paredtothecontrol,thepathologicandultrastructuralchangesuchmoreserious.Theapoptosisindexesofnucleuspulposusellitusmaya
4、cceleratethediscdegenerationinthediabeticrats. 【Keyellitus;Intervertebraldisc;Apoptosis 糖尿病是一組全身性的內(nèi)分泌代謝性疾病,其慢性并發(fā)癥幾乎涉及到全身各器官組織。糖尿病微血管改變除了引起糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病變外〔1,2〕。Ziv等人的研究〔3〕證實(shí)糖尿病會(huì)影響到椎間盤組織。Mobbs等人〔4〕報(bào)告患有糖尿病的腰椎間盤突出癥患者手術(shù)后效果的優(yōu)良率明顯低于非糖尿病患者,且術(shù)后復(fù)發(fā)率也較高,其原因還不清楚。本實(shí)驗(yàn)探討大
5、鼠糖尿病和椎間盤退變之間的關(guān)系。 1材料與方法 1.1動(dòng)物模型的制備和取材 1.1.1動(dòng)物模型的制備體重200~250gSD雄性大鼠30只(由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),隨機(jī)分為對(duì)照組15只和實(shí)驗(yàn)組15只。用快速血糖儀(美國(guó)強(qiáng)生公司,OneTouchⅡ)測(cè)定大鼠尾靜脈血糖。禁食24h后,實(shí)驗(yàn)組大鼠,腹腔單次按50mg/kg注射鏈脲佐菌素溶液(STZ,美國(guó)Sigma公司),用枸櫞酸鈉緩沖液溶解(pH=4.5)。對(duì)照組僅給予等量枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射??崭寡浅掷m(xù)3d≥13.8mmol/L為糖尿病大鼠模型?! ?.1.2實(shí)驗(yàn)
6、取材分別于造模成功后4、8、12g/kg腹腔注射麻醉,解剖后迅速鉗取全段腰椎,取腰5/6椎間盤組織(包括終板、髓核和纖維環(huán)),10%甲醛固定,制成蠟塊?! ?.2椎間盤組織學(xué)觀察采用石蠟切片,切片厚6μm,作普通HE染色,觀察椎間盤組織形態(tài)及病理變化?! ?.3椎間盤超微結(jié)構(gòu)觀察每組隨機(jī)取兩個(gè)椎間盤(腰2/3),送武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院電鏡室常規(guī)制樣,用透射電子顯微鏡觀察終板微血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及椎間盤的相關(guān)結(jié)構(gòu)?! ?.4髓核細(xì)胞凋亡率的測(cè)定末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡:具體操作按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)
7、行。細(xì)胞中有棕黃色顆粒者為陽(yáng)性凋亡細(xì)胞,每張切片各選擇5個(gè)視野,在高倍鏡下(10×40)計(jì)算凋亡細(xì)胞細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比,得出髓核細(xì)胞凋亡率,組間比較?! ?.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,數(shù)據(jù)以x±s表示,使用t檢驗(yàn)?! ?結(jié)果 2.1大鼠的血糖測(cè)定兩組大鼠在注射STZ溶液前后,血糖分別為:注射前對(duì)照組(5.21±0.696),實(shí)驗(yàn)組(5.31±0.519);注射后對(duì)照組(5.13±0.464),實(shí)驗(yàn)組(20.27±2.6)其血糖水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?! ?.2椎間盤的病理
8、變化組織學(xué)表現(xiàn):對(duì)照組4. 圖1各組椎間盤組織病理學(xué)觀察(HE,×40) 2.3椎間盤超微結(jié)構(gòu)觀察①對(duì)照組細(xì)胞膜完整,胞漿內(nèi)有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),高爾基體、溶酶體、線粒體等細(xì)胞器清晰可見,也可見到糖原顆粒及少量脂滴。軟骨細(xì)胞呈梭形,細(xì)胞膜完整,胞漿內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較發(fā)達(dá),可清楚見