微生物純種分離與活菌計數(shù)法小論文

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1、綜合性（設(shè)計性）實驗實驗報告實驗名稱:姓名:指導(dǎo)教師:專業(yè):實驗班級:實驗時間:實驗地點:成績:微生物純種分離與活菌計數(shù)法生物科學(xué)微生物實驗室微生物純種分離與活菌計數(shù)法一.實驗?zāi)康?.了解從土壤中分離和純化微生物的基本原理2.掌握常用的微生物分離和純化的方法（涂布平板法、平板劃線分離法、稀釋倒平板法）3.學(xué);g通過平板菌落進行活菌技術(shù)的原理與方法二.實驗原理自然界中，不同種類的微生物絕大多數(shù)都是混雜生活在一起，當(dāng)我們希望獲得某一種微生物時，就必須從混雜的微生物類群中分離它，以得到只含有這一種微生物的純培養(yǎng)。這種獲得純培養(yǎng)的方法稱為微生物的分離與純化。常

2、用的方法有涂布平板法、平板劃線分離法、稀釋倒平板法、梯度稀釋法等，最終使單個微生物細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上生長而形成單個菌落，從而獲得若干個細(xì)菌的純培養(yǎng)。為了獲得某種微生物的純培養(yǎng)，一般是根據(jù)該微生物對營養(yǎng)、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑造成只利于此菌生長，而抑制其它菌生長的環(huán)境，從而淘汰其他一些不需要的微生物i，然后分離純化該微生物，直至得到純菌株。三.實驗方法1.梯度稀釋法2.涂布平板法1.平板劃線分離法2.稀釋倒平板法一.主要實驗儀器與材料1.高壓蒸汽火菌鍋、恒溫電熱干燥箱、生化培養(yǎng)箱2.器材：酒精燈，電爐，接種環(huán)，

3、無菌試管，三角瓶，記號筆，天平，火柴，無菌培養(yǎng)皿，無菌移液管，玻璃涂棒，試管架、無菌生理鹽水，盛無菌水并帶冇玻璃珠的三角燒瓶等。二.實驗步驟（一）樣品微生物的分離祥品的稱量：準(zhǔn)確稱取祥品10g樣品的預(yù)處理：將稱取好的樣品10g，放入盛90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，搖床約20min，使樣品與水充分混合，將菌分散。樣品的稀釋：梯度稀釋法取7—8支火菌空試管，用一支10ml無菌吸管分別加入9ml無菌水。用一支lml無菌移液管取從預(yù)處理好的樣品懸液中吸取1ml注入盛存9ml無菌水中，充分混勻，然后按照以上發(fā)法依次稀釋成10-2、10-3、……10~1

4、0'O（二）樣品微生物的純化（1）涂布平板法：用移液槍分別取適合稀釋度液lml于倒好的培養(yǎng)棊且凝固好的培養(yǎng)皿屮，用無菌涂布棒將稀釋液充分涂開，待干。每個稀釋梯度一般2-3個平行。（2）平板劃線分離法：用移液管分別取適合稀釋度液（一般取3個梯度）于倒好培養(yǎng)棊且凝固好的培養(yǎng)皿上按“Z”形劃線。（3）梯度稀釋法：用移液管分別取不于同濃度的稀釋液，將其均勻分布于平板培養(yǎng)棊上。（4）稀釋倒平板法：分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至45°C左右的瓊脂培養(yǎng)棊混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿屮，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間即可出出菌落。（

5、三）樣品微生物的培養(yǎng)培養(yǎng)條件：細(xì)菌一般是32.5±2.5°C培養(yǎng)時間：細(xì)菌2天（四）樣品微生物的計數(shù)首先選取平均菌落數(shù)在30-300個之間的平皿，作為菌落總數(shù)測定的范圍。當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)。一.實驗記滎：適于計數(shù)的平板上的菌落數(shù)在30-300之間，細(xì)菌稀釋度為：104105106放線菌稀釋度為：103104105真菌稀釋度為：102103104計數(shù)時每隔24h統(tǒng)計菌落數(shù)，菌落特征包括：形狀大小顏色隆起程度等。一.實驗結(jié)果與討論制備培養(yǎng)棊時，加熱溶解瓊脂時要不斷地攪拌，防止液體劇烈沸騰溢出。接種操作時盡

6、量避免外界細(xì)菌的滲入，使得培養(yǎng)棊屮菌落參雜Y雜菌劃線時應(yīng)嚴(yán)格按照老師的要求，熟練操作，盡量劃線均勻二.實驗結(jié)果：純種分離是微生物實驗常用的技術(shù)，在實驗屮常常被我們使用。計數(shù)法分為直接計數(shù)法和間接計數(shù)法。直接計算法常用顯微鏡技術(shù)，但是不能區(qū)分死菌和活菌，難以計數(shù)微小的細(xì)菌。間接計數(shù)法常用的是稀釋涂布平板計數(shù)，稀釋度很重要，一般選用三個稀釋度屮的第二個稀釋度作為最佳，因為平均菌落數(shù)為最好。