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《一種鉤藤屬植物的rdnaits序列分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、一種鉤藤屬植物的rDNAITS序列分析［摘要］目的以核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(rDNAITS)序列作為分子條形碼，對(duì)一種常用中藥材鉤藤進(jìn)行分子鑒定和遺傳分析，并闡明其在鉤藤屬內(nèi)種間的分子系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。方法通過改良十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法對(duì)2015年7月采集的鉤藤進(jìn)行總DNA提取，利用通用引物對(duì)rDNAITS序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)克隆、測(cè)序后，運(yùn)用MEGA軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果測(cè)序得到該鉤藤的rDNAITS區(qū)序列長(zhǎng)度為718bp，序列分析結(jié)果顯示其與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中己有的鉤藤(Uncariarhyncho
2、phylla)rDNAITS區(qū)序列之間相似度達(dá)99.8%,并且在系統(tǒng)發(fā)育樹中并排聚類成一支。結(jié)論基于ITS區(qū)序列測(cè)定分析的分子生物學(xué)方法和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹的分子遺傳學(xué)方法，可以對(duì)鉤藤屬藥用植物進(jìn)行分子鑒定和遺傳分析，為鉤藤屬藥用植物的種間分類地位以及種類鑒定提供準(zhǔn)確的分子證據(jù)。［關(guān)鍵詞］鉤藤；ITS序列；分子鑒定；系統(tǒng)發(fā)育樹［中圖分類號(hào)］S567.239［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A［文章編號(hào)]1674-4721(2016)03(a)-0004-04[Abstract]ObjectiveToclarifythephylogeneticrelati
3、onshipofonespeciesofUncaria，molecularidentificationandgeneticanalysiswerecarriedoutbyusingtherDNAITSsequenceasmolecularbarcoding.MethodsMolecularidentificationandgeneticanalysiswerecarriedoutwiththerDNAITSsequenceasmolecularmarker.TotalDNAwasextractedwithmodifiedCTABm
4、ethodandtherebyrDNAITSregionswereamplifiedwithuniversalprimer，sequencedandphylogeneticanalysedwithMEGA6.0atJuly2015.ResultsTheentirerDNAITSsequenceofUncariawas718bp.SequenceanalysisshowedthattherDNAITSsequencewascloselyrelatedtoUncariarhynchophyllaavailableinGenBankan
5、dthesimilarityreached99.8%.ConclusionBasedonmolecularbiologymethodsofrDNAITSregionanalysis，molecularidentificationisavailableinaccurateclassificationontraditionalChinesemedicinalmaterialplantsinGenusUncariaandprovidemolecularevidencefortaxonomyandidentificationofdiffe
6、rentspeciesinGenusUncaria.[Keywords]Uncaria；ITSsequence；Molecularidentification；Phylogenetictree鉤藤是茜草科鉤藤屬植物，主要分布于我國(guó)廣東、廣西、四川、云南、貴州等地區(qū)?！吨袊?guó)藥典》2015年版規(guī)定的鉤藤為茜草科植物鉤藤［Uncariarhynchophylla(Miq.)Miq.exHavil.］、大葉鉤藤［UncariamacrophyllaWall.］、毛鉤藤［UncariahirsutaHavil.］、華鉤藤［Uncariasi
7、nensis(Oliv.)Havil.］或無柄果鉤藤［UncariasessilifructusRoxb.］的干燥帶鉤莖枝［1］。鉤藤為常用中藥，藥用歷史悠久，具有息風(fēng)定驚、清熱平肝的功效。但是鉤藤藥材在市場(chǎng)上的分類鑒定比較混亂，影響了中藥材用藥的準(zhǔn)確性和安全性。因此，有必要運(yùn)用DNA分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)一步對(duì)鉤藤屬植物不同種間進(jìn)行鑒定。核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(rDNAITS)序列作為分子條形碼的鑒定能力己經(jīng)在藥用植物很多個(gè)科屬基原植物及藥材的鑒定中得到驗(yàn)證［2-12］。本研宄對(duì)采自廣州中醫(yī)藥大學(xué)藥王山的一種鉤藤屬藥用植物進(jìn)行分子鑒定和遺傳分
8、析?，F(xiàn)報(bào)道如下。1材料與方法1.1材料來源與鑒定實(shí)驗(yàn)用的鉤藤樣品于2015年7月采集于廣州中醫(yī)藥大學(xué)藥王山。常綠木質(zhì)藤本；小枝四棱柱形，褐色，季凈無毛；葉腋有成對(duì)或單生的鉤，向下彎曲，先端尖；葉對(duì)生，具短柄，葉片卵形，卵狀長(zhǎng)圓形或橢形。本鉤藤樣品經(jīng)
