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《瀕危藥用植物盤龍參rdnaits序列分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、—30—江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2014年第42卷第5期李家敏，周秀玲，姜瓊．瀕危藥用植物盤龍參rDNAITS序列分析［J］．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42(5):30－33．瀕危藥用植物盤龍參rDNAITS序列分析李家敏，周秀玲，姜瓊(宜春學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江西宜春336000)摘要:采用改良CTAB法提取2份江西省盤龍參總DNA，利用通用引物對rDNAITS序列進行PCＲ擴增，克隆后測序，應(yīng)用MEGA5．2軟件進行序列分析和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，以研究盤龍參ITS片段遺傳多樣性，分析該片段在盤龍參DNA分子鑒別和綬草屬植物
2、系統(tǒng)學(xué)研究中的意義。結(jié)果表明，盤龍參樣本的rDNAITS長度為766～767bp;該樣本與GenBank中綬草屬的rDNAITS對比分析，ITS1、ITS2長度分別為214～245、256～367bp，變異位點分別為16．17%、3.50%，ITS總變異位點為9．27%;基于ITS序列，用p－distances法計算遺傳距離和NJ法建立系統(tǒng)發(fā)育樹，2段序列在綬草屬種內(nèi)保守，中間有較大變異，可作為盤龍參分子鑒定標(biāo)記，而綬草屬的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系尚須進一步研究。關(guān)鍵詞:綬草屬;盤龍參;ITS序列;遺傳多態(tài)性;藥用植物中圖分
3、類號:S567．230．1文獻標(biāo)志碼:A文章編號:1002－1302(2014)05－0030－04盤龍參為蘭科綬草屬植物綬草［Spiranthessinensis1材料與方法(Pers．)Ames］的根或全草，為多年生草本植物，以全草入藥，味甘，性溫，入肺、肝、腎三經(jīng)，具有滋陰益氣、涼血解毒、潤肺1．1材料［1］止咳的功效，主要含有二氫菲類、黃酮類、苯丙素類、甾醇1．1．1試驗材料2013年3月，于江西宜春和贛州2個不類、三萜類和脂肪酸等多種化學(xué)成分，屬于名貴藥材，具有較同生態(tài)群采集樣本，經(jīng)課題組周秀玲副教授鑒
4、別為蘭科綬草高的藥用價值。Peng等在盤龍參根中發(fā)現(xiàn)一種新的二氫黃屬植物盤龍參，樣本憑證保存于江西省天然藥物活性成分研酮，對肺癌細胞A549、肝癌細胞BEL27402、食管癌細胞究重點實驗室。來源于Genbank的綬草屬rDNAITS序列相HT－29、乳腺癌細胞MCF－7、胃癌細胞SGC－7901、白血病關(guān)信息見表1。［2］細胞K562和腎癌細胞A498等多種癌細胞具有一定毒性。表1來源于GenBank的綬草屬rDNAITS序列盤龍參現(xiàn)為國家二級保護植物，已列入《瀕危野生動植登錄號物種來源地發(fā)布者［3］物種國際貿(mào)
5、易公約》，為國際瀕危植物。董必慧等對江蘇AJ539489Spiranthescernua美國Salazar沿海灘涂濕地的盤龍參資源進行調(diào)查，并提出有關(guān)盤龍參資AF301443Spiranthesdiluvialis美國Szalanski［4］。筆者在江西宜春和贛州調(diào)查時發(fā)現(xiàn)野生HE575517Spiranthesnebulorum美國Szalanski源保護的策略AF301441Spiranthesromanzoffiana美國Szalanski種盤龍參零星分布，對其采樣進行馴化，在種植過程中發(fā)現(xiàn)盤HE57551
6、8Spiranthessinensis美國Szalanski龍參種子萌發(fā)率低，長勢弱，成活極少，且植株結(jié)實不飽滿，明AY364888Spiranthesspiralis西班牙Bernardos顯不如野外生長旺盛。對采樣進行回訪，采樣點的盤龍參數(shù)AB740173Spiranthessinensisvar．a(chǎn)moena日本Ohga量變少或不見蹤跡，這對盤龍參的遺傳多樣性研究造成困難。AB740174Spiranthessinensisvar．a(chǎn)moena日本Ohga物種的瀕危與其遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性有關(guān)，遺傳多樣AB
7、740175Spiranthessinensisvar．sinensis日本OhgaAB740176Spiranthessinensisvar．sinensis日本Ohga性的高低是物種生存能力的具體體現(xiàn)。目前，在研究遺傳結(jié)構(gòu)方面常采用DNA分子標(biāo)記技術(shù)，rDNAITS序列分析技術(shù)1．1．2主要儀器超低溫冰箱(7010702，Thermo);水浴鍋是其中之一。rDNAITS序列是核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)，位于(HH－4);離心機(Eppendorf－G5415Ｒ，德國);XP基因擴增18S和26SrDNA基因之間，包括
8、了ITS1－5．8SrDNA－ITS2儀(BYQ602101－174，杭州博日);雙穩(wěn)定時電泳儀(DYY－區(qū)段，具有較好的保守性。本研究首次通過rDNAITS序列的6C，北京六一);紫外分光光度計(UV－2000);凝膠成像系統(tǒng)遺傳分析為盤龍參種間鑒定和種內(nèi)遺傳多樣性提供生物學(xué)理(GelMediaSystem，北京創(chuàng)美偉業(yè))。論依據(jù)，并根據(jù)序列堿基差異、G+C含量差異和片
