高效液相色譜hplc簡介

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1、高效液相色譜（HPLC）簡介盛衛(wèi)堅(jiān)目錄1,液相色譜分析法的發(fā)展2,高效液相色譜的特點(diǎn)3,高效液相色譜儀簡介4,液相色譜法介紹5,分析方法的選擇6,實(shí)際分析操作過程1、液相色譜分析法的發(fā)展20世紀(jì)初：俄國植物學(xué)家茨維特提出經(jīng)典液相色譜法。經(jīng)典液相色譜法包括柱色譜、薄層色譜、紙色譜。20世紀(jì)60年代末：隨著色譜理論的發(fā)展、高效細(xì)微固定相的開發(fā)、高壓恒流泵及高靈敏度檢測(cè)器的應(yīng)用，高效液相色譜法得到了突破性的發(fā)展。2.1HPLC的特點(diǎn)（一）項(xiàng)目高效液相色譜法經(jīng)典液相色譜法色譜柱：柱長/cm柱內(nèi)徑/mm10～252～1010～20010～50固定相粒徑/μm5～50

2、75～600色譜柱柱效（理論塔板數(shù)）2×103～5×1042～50柱壓降/MPa5～150.001～0.3進(jìn)樣量/g10-6～10-20.1～10分析時(shí)間/h0.05～1.01～202HPLC的特點(diǎn)２.2HPLC的特點(diǎn)（二）項(xiàng)目高效液相色譜法氣相色譜法進(jìn)樣方式樣品制成溶液樣品需氣化或裂解流動(dòng)相溶液惰性氣體分離原理吸附、分配、篩析、親和等吸附和分配檢測(cè)器UVD、PDAD、RID等TCD、FID、ECD等應(yīng)用范圍低、中、高沸點(diǎn)有機(jī)化合物離子型無機(jī)化合物熱不穩(wěn)定化合物生物活性分子低沸點(diǎn)有機(jī)化合物永久性氣體3、液相色譜儀簡介貯液罐A高壓輸液泵A阻尼器A貯液罐B高壓

3、輸液泵B阻尼器B初步混合器壓力傳感器混合器進(jìn)樣器色譜柱檢測(cè)器譜圖輸出3.1高效液相色譜儀構(gòu)造3.2高壓輸液泵簡介高壓輸液泵的一般要求：泵體材料耐酸、耐堿、耐化學(xué)腐蝕；耐壓40～50MPa，能連續(xù)工作；輸出流量穩(wěn)定，重復(fù)性佳；輸出流量范圍寬，對(duì)填充柱：0.1～100mL／min。注射型泵------輸出精確，無脈動(dòng)，需更換溶劑而中斷工作?！艉懔鞅猛鶑?fù)型泵------造價(jià)低廉，溶劑更換方便，但存在脈動(dòng)?！艉銐罕?-------壓力恒定，但流量不恒定；3.3阻尼器介紹阻尼器----消除、減輕往復(fù)式柱塞泵輸出的壓力脈動(dòng)。3.4.1檢測(cè)器簡介（一）◆紫外吸收檢測(cè)器（

4、UVD）原理：用特定波長的紫外光照射樣品池，通過檢測(cè)透光率的變化來測(cè)定樣品濃度的檢測(cè)器。它具有波長固定，波長可變和光二極管陣列三種類型。特點(diǎn)：選擇性檢測(cè)器、對(duì)流量和溫度敏感性低、靈敏度較高（10-9g）?！粽酃庵笖?shù)檢測(cè)器（RID）原理：監(jiān)測(cè)參比池和測(cè)量池中溶液的折射率之差來測(cè)量試樣濃度的檢測(cè)器。特點(diǎn)：通用性檢測(cè)器，溫變化要保持在±0.001℃、靈敏度低（10-6g）。3.4.2檢測(cè)器簡介（二）◆電導(dǎo)檢測(cè)器（ECD）原理：監(jiān)測(cè)溶液的電導(dǎo)率變化的檢測(cè)器。特點(diǎn)：選擇性檢測(cè)器、測(cè)量時(shí)要求恒溫、對(duì)流動(dòng)相的組成變化有明顯響應(yīng)、靈敏度低（10-3g）。適用于離子型化合物

5、?！魺晒鈾z測(cè)器（FLD）原理：某些溶質(zhì)在紫外光激發(fā)后能發(fā)射可見光（熒光）的性質(zhì)檢測(cè)。特點(diǎn)：選擇性檢測(cè)器、靈敏度高（10-12g）、對(duì)流量和溫度敏感性低。3.4.3檢測(cè)器簡介（三）◆蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）原理：通過檢測(cè)光散射程度而測(cè)定溶質(zhì)濃度的檢測(cè)器。色譜柱后流出物在通向檢測(cè)器途中，被高速載氣（氮?dú)猓﹪姵伸F狀液滴，再進(jìn)入蒸發(fā)漂移管中，流動(dòng)相不斷蒸發(fā)，含溶質(zhì)的霧狀液滴形成不揮發(fā)的微小顆粒，被載氣載帶通過檢測(cè)器。在檢測(cè)器中，光被散射的程度取決于溶質(zhì)顆粒的大小與數(shù)量。特點(diǎn)：消除了溶劑的干擾，不受溫度變化影響，靈敏度高，是通用型檢測(cè)器。4、色譜分析法簡介液固色

6、譜------以固體吸附劑為固定相，依靠吸附－脫附平衡實(shí)現(xiàn)分離，常用的固定相有碳酸鈣、硅膠、三氧化二鋁、氧化鎂、活性炭等。特點(diǎn)：有時(shí)會(huì)發(fā)生不可逆吸附，應(yīng)用受到限制。液液色譜------以吸附載帶在惰性固相載體上的極性或非極性固定液為固定相，依靠溶解－解吸平衡實(shí)現(xiàn)分離。特點(diǎn)：固定液可選擇余地大，重現(xiàn)性、分離效果好。4.1.1色譜分析法介紹（一）4.1.2色譜法簡介（二）體積排阻色譜法--------以多孔性凝膠為固定相，借助多孔性凝膠孔徑的大小，使樣品中的大分子不能進(jìn)入凝膠孔洞而完全被排阻，只能沿凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱，而首先被洗脫出來。被分析樣品可按

7、分子的相對(duì)大小分別先后流出。特點(diǎn)：洗脫時(shí)間短，但不適于分離組成復(fù)雜的混合物。適用范圍：分子量差別較大的樣品。離子對(duì)色譜法--------分析離子化的強(qiáng)極性化合物。親和色譜法等等4.1.3色譜法簡介（三）◆鍵合相色譜法簡介鍵合相色譜-------是由液液色譜發(fā)展起來的，在高效液相色譜法中占有極其重要的地位。將有機(jī)官能團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)共價(jià)鍵合到硅膠（載體）表面的游離羥基上，生成化學(xué)鍵合固定相，解決固定液的流失問題,是目前用的最多的一種色譜分析法。根據(jù)鍵合固定相與流動(dòng)相相對(duì)極性的強(qiáng)弱，分為正相鍵合相色譜法與反相鍵合相色譜法。正相鍵合相色譜------固定相極性強(qiáng)；

8、反相鍵合相色譜------固定相極性弱。４.2.1色譜柱簡介（一）