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1、多糖的分離純化及分析一、多糖的提取方法（一）溶劑提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一種方法.多糖是極性大分子化合物，提取時(shí)應(yīng)選擇水、醇等極性強(qiáng)的溶劑.用水作溶劑來(lái)提取多糖時(shí)，可以用熱水浸煮提取，也可以用冷水浸提滲濾，然后將提取液濃縮后，在濃縮液中加乙醇，使其最終體積分?jǐn)?shù)達(dá)到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性質(zhì)，使多糖從提取液中沉淀出來(lái)，室溫靜置5h，多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和得率均較高.2、酸堿提法有些多糖適合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。有些多糖在堿液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。與酸提類似
2、，堿提中堿的濃度也應(yīng)得到冇效控制，因?yàn)閮有┒嗵窃趬A性較強(qiáng)時(shí)會(huì)水解。3、超臨界流體萃取法超臨界流體萃取技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的提取分離技術(shù).（二）生物酶提取法酶技術(shù)是近年來(lái)廣泛應(yīng)用到有效成份提取中的一項(xiàng)生物技術(shù)，在多糖的提取過(guò)程中，使用酶可降低提取條件，在比較溫和的條件中分解植物組織，加速多糖的釋放或提取。此外，使用酶還可分解提取液屮淀粉、果膠、蛋Q質(zhì)等的產(chǎn)物，常用的酶有蛋白酶，纖維素酶，果膠酶等。（三）超聲提取法超聲波是一種高頻率的機(jī)械波，其主要原理是利用超聲波產(chǎn)生的“空化作用”對(duì)細(xì)胞膜的破壞，冇利用植物冇效成分的釋放
3、，而i超聲波能形成強(qiáng)人的沖擊波或高速射流，有效地減小、消除與水相之間的阻滯層，加大了傳質(zhì)效率，有助于溶質(zhì)的擴(kuò)散。超聲波提取與傳統(tǒng)的提取方法相比，有提取效率高、時(shí)間短、耗能低等優(yōu)點(diǎn)。（四）微波提取微波是頻率介于300MHz和300GHz之間的非電離電磁波，微波提取的原理是微射線輻射于溶劑并透過(guò)細(xì)胞壁到達(dá)細(xì)胞內(nèi)部，由于溶劑及細(xì)胞液吸收微波能細(xì)胞內(nèi)部溫度升高，壓力增大，當(dāng)壓力超過(guò)細(xì)胞壁的承受能力時(shí)，細(xì)胞壁破裂，位于細(xì)胞內(nèi)部的有效成份從細(xì)胞中釋放出來(lái)，傳遞轉(zhuǎn)移到溶劑周圍被溶劑溶解。二、多糖的分離純化（一）多糖的分離采用一般方法提取的
4、多糖通常是多糖的混合物，分級(jí)的方法可達(dá)到純化的FI的.可按溶解性不同進(jìn)行分級(jí)、按分子大小和形狀分級(jí)（如分級(jí)沉淀、超濾、分子篩、層析等），也可按分子所帶基團(tuán)的性質(zhì)分級(jí).1、按溶解性不同分離（1）分步沉淀法分步沉淀法是根據(jù)不同多糖在不同濃度低級(jí)醇、酮屮具有不同溶解度的性質(zhì)，從小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮進(jìn)行分步沉淀.（2）鹽析法鹽析法是根據(jù)不同多糖在不同鹽濃度中溶解度不同而將其分離的一種方法。常用的鹽析劑有氯化鈉、氯化鉀、硫酸銨等，其中以硫酸銨最佳。2、按電離性質(zhì)不同分離季胺鹽沉淀法季胺氫氧化物是一類乳化劑，能與酸性多糖形成
5、不溶性化合物季銨絡(luò)合物，此絡(luò)合物在低離子強(qiáng)度的水溶液中不溶解而產(chǎn)生沉淀。若提高多糖液pH值或加入硼砂緩沖液，也可使屮性多糖沉淀分離。常用季銨鹽有十六烷棊三甲棊季銨鹽的溴化物及其氫氧化物和十六烷基毗啶。3、柱層析法(1)凝膠柱層析法凝膠柱層析法常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose),以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑，從而使不同大小的多糖分子得到分離純化，但不適宜粘多糖的分離。(2)纖維素陰離子交換劑柱層析法纖維素陰離子交換劑柱層析法常用的交換劑為DEAE—纖維素和ECTEOLA一纖維
6、素，分類硼砂型和堿型兩種，洗脫劑可用不同濃度堿溶液、硼砂溶液、鹽溶液，其優(yōu)點(diǎn)可吸附雜質(zhì)、純化多糖，并適用于分離各種酸性、屮性多糖和粘多糖。如百合多糖、北沙參多糖、太子參多糖等。(3)活性炭柱層析法活性炭吸附量大、效率高，是分離水溶性物質(zhì)的常用吸附劑。柱層析時(shí)活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀釋劑，以增加溶液的流速。糖溶液上柱后先用水洗脫無(wú)機(jī)鹽、單糖等再依次增加乙醇濃度進(jìn)行洗脫。(4)離子交換柱層析和普通凝膠柱層析聯(lián)用法有些植物的多糖成分復(fù)雜，除中性多糖外，還含有糖醛酸等，因此往往兩種不同性質(zhì)的色譜柱聯(lián)用才能得到單一多糖組分。(5
7、)三種層析柱聯(lián)用采用離子交換葡聚糖凝膠柱、丙烯葡聚糖凝膠柱和葡聚糖凝膠柱三者聯(lián)用，即先進(jìn)行DEAE-SephadexA柱層析，用蒸餾水洗脫。水洗組分進(jìn)一步用SephacrylS柱層析，得到主要組分再用SephadexG—100柱層析，有時(shí)會(huì)有較高的得率。4、色譜分離法常用兩種色：譜分離方法：一是凝膠柱色譜法，二是離子交換色譜法.5、膜分離法膜分離技術(shù)(MST)是一種高效分離技術(shù)，分離過(guò)程以選擇透過(guò)性膜作為分離介質(zhì)，通過(guò)在膜兩側(cè)施加某種推動(dòng)力(壓力差、化學(xué)位差、電位差等)，使原料液中組分有選擇性的通過(guò)膜.目前應(yīng)用較多的是超濾和
8、微濾技術(shù).(二)多糖的純化1、除蛋白.?除蛋白質(zhì)吋一般選擇能使蛋白質(zhì)沉淀而不使多糖沉淀的試劑來(lái)處理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必須處理時(shí)間短，溫度低，避免多糖降解。Sevage法(氯仿：戊醇/丁醇=4:1)和三氟三氯乙烷法在避免降解上有較好效果但要達(dá)到除盡游離蛋白質(zhì)的目的仍需反復(fù)處理。凍融
