多糖的提取_分離純化及分析鑒定方法研究

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1、第27卷第12期河南科學(xué)Vol.27No.122009年12月HENANSCIENCEDec.2009文章編號:1004-3918(2009)12-1524-06多糖的提取、分離純化及分析鑒定方法研究12111徐翠蓮,杜林洳,樊素芳,蘇惠,萬鄭凱(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院,鄭州450002;2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草學(xué)院,鄭州450002)摘要:詳細介紹了動植物多糖的常見提取、分離純化方法的最新研究進展,并比較了各種方法的優(yōu)缺點.每種方法都有各自的優(yōu)缺點,在提取時應(yīng)根據(jù)所選材料的性質(zhì)選用不同的方法,有些方法在一定的條件下可與別

2、的方法協(xié)同作用,并對糖的含量測定及分析鑒定方法的研究進展作了概述.關(guān)鍵詞:多糖;提取;分離純化;分析鑒定;研究進展中圖分類號:O629.12文獻標(biāo)識碼:A多糖是由單糖連接而成的多聚物,廣泛存在于動物細胞膜和植物、微生物的細胞壁中.對多糖的研究可追溯1936年Shear對多糖抗腫瘤活性的發(fā)現(xiàn),至20世紀(jì)50年代,陸續(xù)發(fā)現(xiàn)一些真菌多糖和高等植物多糖具有明顯的抑瘤活性.最近又發(fā)現(xiàn)許多中藥多糖還具有降血糖作用.70年代以來,科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)多糖及復(fù)合物在生物體內(nèi)不僅作為能量資源和構(gòu)成材料,重要的是它存在于一切細胞膜結(jié)構(gòu)中,參與細胞

3、的各種活[1-3]動.大量研究表明,許多植物多糖具有生物活性,如免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、降血脂、抗輻射、抗菌抗病[4]毒、延緩衰老、保護肝臟等作用,而且對機體幾乎無毒副作用,因此引起國內(nèi)外藥理學(xué)家、生物學(xué)家和化學(xué)家[5]們的關(guān)注.有些植物多糖還有防治病害的作用,因此多糖研究日益受到關(guān)注,國際科學(xué)界甚至提出21世紀(jì)是多糖的世紀(jì).1多糖的提取方法[6-7]生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、動物多糖3大類.多糖的提取首先要根據(jù)多糖的存在形式及提取部位,決定在提取之前是否做預(yù)處理.動物多糖和微生物多糖多有脂質(zhì)包圍,一般需

4、要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液進行回流脫脂,釋放多糖.植物多糖提取時需注意一些含脂較高的根、莖、[8]葉、花、果及種子類,在提取前,應(yīng)先用低極性的有機溶劑對原料進行脫脂預(yù)處理,目前多糖的提取方法主要有溶劑提取法、生物提取法、強化提取法等.1.1溶劑法1.1.1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一種方法.多糖是極性大分子化合物,提取時應(yīng)選擇水、醇等極性強的溶劑.用水作溶劑來提取多糖時,可以用熱水浸煮提取,也可以用冷水浸提滲濾,然后將提取液濃縮后,在濃縮液中加乙醇,使其最終體積分?jǐn)?shù)達到70%左右,利用多糖不

5、溶于乙醇的性質(zhì),使多糖從提取液中沉淀出來,室溫靜置5h,多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和得率均較高.影響多糖提取率的因素有:水的用量、提取溫度、浸提固液比、提取時間以及提取次數(shù)等.為此,研究者對影響多糖提取工藝的這些因素進行了大[9]量研究.李志洲等研究指出,采用V(紅棗)∶V(水)=1∶20,90℃時浸提2h,反復(fù)浸提2次,紅棗多糖的浸提[10]率可達3.5%.王立娟等以香蕉皮為原料,通過單因子實驗結(jié)合正交試驗研究了香蕉皮多糖的最優(yōu)提取條件,實驗結(jié)果表明:香蕉皮粗多糖的最佳提取條件為:以水為提取劑,料液比1∶20,80℃加熱提取4次

6、,每次提取時間1.5h.在最佳提取條件下,香蕉皮粗多糖的得率為4.25%.水提醇沉法提取多糖不需特殊設(shè)備,生產(chǎn)工藝成本低,安全,適合工業(yè)化大生產(chǎn),是一種可取的提取方法.但由于水的極性大,容易把蛋白質(zhì)、苷類等水溶性的成分浸提出來,從而使提取液存放時腐敗變質(zhì),為后續(xù)的分離帶來困難,且該法提取比較耗時,提取率也不高.1.1.2酸提法為了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基礎(chǔ)上發(fā)展了酸提取法.如某些含葡萄糖醛酸等收稿日期:2009-07-23基金項目:國家煙草專賣局重大科技攻關(guān)項目(110200401004)作者簡介:徐翠蓮(1

7、965-),女,河南西平人,教授,博士,從事有機化學(xué)教學(xué)與研究.2009年12月徐翠蓮等:多糖的提取、分離純化及分析鑒定方法研究-1525-酸性基團的多糖在較低pH值下難以溶解,可用乙酸或鹽酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可[11]加入銅鹽等生成不溶性絡(luò)合物或鹽類沉淀而析出.KimikoAnno將藻粉用甲醇預(yù)處理后→取100g預(yù)處理-1物→用1.31倍0.17mol·LHCl(pH=2)在65~70℃提取1h→離心→沉淀再次提取,重復(fù)3次→合并上清液,用NaOH中和→真空蒸發(fā)至干后溶于0.5L水→離心除去不

8、溶物→加2倍體積乙醇→沉淀用乙醇和乙醚浸[12]洗→真空干燥→得褐藻糖膠粗品17.8g,巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為23.7%.任初杰等研究了花生粕多糖的酸提法:花生粕1g→鹽酸溶液提取→10000r/min離心15min→取上清液+3倍95%乙醇沉淀→過夜→10000r/min-1離心15min→沉淀用0.1mol·L鹽酸溶液溶解.+由于H

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