鹽脅迫時長對小麥葉片蛋白總量影響的研究

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1、鹽脅迫時長對小麥葉片蛋白總量影響的研究［摘要］為了探究小麥的抗鹽機(jī)理，實驗利用尿素硫腺法提取小麥葉片蛋白質(zhì)，然后用考馬斯亮藍(lán)法分別測定對照和Na2C()3/NalIC03鹽脅迫12h、24h、36h、48h的蛋白質(zhì)含量，并分析其變化情況。結(jié)果表明在12h鹽處理后鹽脅迫相關(guān)蛋白含量上升，超過12h后蛋白質(zhì)總量下降。另外，利用SDS-PAGE技術(shù)對提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離分析，結(jié)果表明跟對照組相比鹽脅迫后蛋白質(zhì)，有一些多余的條帶，可能是一些跟鹽脅迫有關(guān)的小肽類，酶類。［關(guān)鍵詞］鹽脅迫時長蛋白質(zhì)電泳考馬斯亮藍(lán)法中圖分類號：G633.6文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號

2、：1009-914X(2016)28-0390-01一、刖§(-)鹽脅迫對小麥的影響小麥屬于甜土植物，鹽脅迫對小麥牛長發(fā)育有很重要的影響，在長時間高濃度的鹽脅迫情況下會導(dǎo)致小麥死亡。鹽處理下，根部感受脅迫信號,產(chǎn)生生理反應(yīng)，多方面影響地上部生長。(二)小麥對鹽脅迫的應(yīng)答1?滲透調(diào)節(jié)滲透調(diào)節(jié)可分為離子滲透調(diào)節(jié)和可溶性有機(jī)物有機(jī)物滲透調(diào)節(jié)兩方面。鹽處理下，小麥對人量元素的吸收受到一定程度的限制，因而影響植物的正常牛長發(fā)育。2.大分子蛋白在鹽脅迫中的作用在鹽脅迫情況下，活性氧的產(chǎn)生與消除平衡被破壞，細(xì)胞中活性氧的增加會對胞內(nèi)蛋口質(zhì)和核酸等大分子物質(zhì)造成

3、破壞，對膜系統(tǒng)也造成一定程度的破壞。因此，植物的氧化防御系統(tǒng)便被激活，產(chǎn)生SOD等物質(zhì)消除氧自由基，從而減少自由基對植物的傷害。（三）測定蛋白質(zhì)含量的方法蛋白質(zhì)濃度的測定有關(guān)方法有福林酚試劑法、雙縮腺法＞Bradford法、凱氏定氮法、紫外吸收法等，其中應(yīng)用較為廣泛的是Bradford法。（四）蛋白質(zhì)組學(xué)研究和進(jìn)展Tiselius在1937年發(fā)明的電泳技術(shù)，為蛋白質(zhì)分離提供新思路。在1956年，Smithies發(fā)明了凝膠電泳技術(shù)，首先用淀粉凝膠分離蛋白質(zhì)。在此Z后，蛋白質(zhì)分離技術(shù)即凝膠電泳技術(shù)得到了迅速的發(fā)展，其屮不連續(xù)緩沖體系等一些新技術(shù)的發(fā)明

4、也為蛋白質(zhì)組學(xué)研究和進(jìn)展起了重要作用。不連續(xù)的凝膠電泳技術(shù)，涉及很多緩沖液和很多凝膠系統(tǒng)。給電極施加電壓后，緩沖離子從上面的凝膠至下面的凝膠。（五）本研究的目的和意義1.理論意義植物的主要器官包括根、莖、葉，葉進(jìn)行光合作用，合成能源物質(zhì)，為植物提供營養(yǎng)。在土壤鹽脅迫條件下，植物會失去一定量的水分，葉片結(jié)構(gòu)會遭到一定程度的破壞，光合速率會下降，從而影響植物牛長發(fā)育。小麥葉片蛋白質(zhì)組學(xué)的分析等可為植物葉片響應(yīng)鹽脅迫機(jī)制提供重要的新的線索。1.實踐意義小麥?zhǔn)鞘澜缟现饕募Z食作物之一。目前，世界上某些地區(qū)存在著土壤鹽堿化問題，是人類面臨的生態(tài)危機(jī)之一，給

5、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)小麥造成一定程度的影響。世界現(xiàn)有耕地中蘇打鹽堿土壤占耕地總面積的60%o所以研究清楚鹽脅迫機(jī)制對小麥牛長發(fā)育的影響，對研究抗鹽脅迫小麥有很好的指導(dǎo)作用。另外，研究植物對鹽堿脅迫的響應(yīng)機(jī)制，為提高鹽堿地種植小麥的數(shù)量和質(zhì)量提供一定的依據(jù)，而且可以幫助修復(fù)鹽堿土地。二、Na2CO3和NaIIC()3脅迫后小麥葉片蛋口的研究(―)實驗方法晉麥(MG115山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院小麥研究所)；(二)實驗方法培養(yǎng)小麥一一鹽處理一一提取小麥葉片屮的蛋白質(zhì)一一裂解階段CoomassiebilliantblueG-250法測小麥蛋白含量三、結(jié)果與分析(-)鹽

6、脅迫不同時長和對照組蛋白含量比較Coomassiebilliantblue法測出鹽脅迫不同時長的葉片蛋白質(zhì)溶液的濃度，進(jìn)而求岀0.8g小麥葉片中蛋白質(zhì)的總量。四、討論對鹽脅迫下小麥葉片蛋白質(zhì)隨時長的變化的研究，為小麥的抗鹽機(jī)制研究提供相關(guān)依據(jù)。提収出0?8g小麥葉片的蛋白質(zhì)，通過已知的體積和蛋白質(zhì)溶液濃度，計算蛋白質(zhì)總量。根據(jù)圖2可知，在鹽處理12h后，蛋白質(zhì)總量有所升高，可能是由于小麥為了抵抗鹽脅迫會產(chǎn)牛一些鹽脅迫蛋白，例如，保護(hù)性酶蛋白、酸性蛋白質(zhì)、水通道蛋白、鈣調(diào)蛋白等。在鹽處理24h后，小??蛋白質(zhì)總量有所下降，36h后，48h后依次下降

7、?？赡苁怯捎谛←溡呀?jīng)遭到破壞，適應(yīng)能力下降。如圖1聚丙烯酰胺電泳條帶分析，結(jié)果顯示有一個主條帶分子量為66.2KD。除此Z外還有一些較弱的條帶。和對照相比有一些多余的條帶，可能是一些與鹽脅迫相關(guān)的小肽或酶類。總體條帶不是特別理想，分析原因有以下兩方面：一方面可能是由于蛋白質(zhì)保存時間過長保存條件限制，有蛋白質(zhì)變性等情況的發(fā)生。另一方面，可能是由于操作不當(dāng)，電極緩沖液中有氣泡所導(dǎo)致。參考文獻(xiàn)［1］馬洪波，曹月陽，陳杰，汪吉東，張永春，常志州.土壤鹽脅迫對小麥養(yǎng)分和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響［J］?江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012,06：1300-1305.［2］高巍，

8、孫慶林，王鵬.聚丙烯酰胺凝膠電泳快速鑒定牛乳蛋白質(zhì)的研究［J］?畜牧與飼料科學(xué)，2008,06：1-3.［3］陳新紅，葉玉秀，周青，黃吉