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《weak通過erk12通路促進大鼠心肌成纖維細胞mmp2與ⅰ型膠原表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在應用文檔-天天文庫。
1、山東大學碩士學位論文CONTENTSChineseabstract．．IEnglishabstractIIISymbolicIllustration．VIAbbreviations．．1MaterialsandMethods9Results．．16Typicalcases．17Discussion．．19Conclusions．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23PhotographsandTables．．24References．．．．．．．．．．．．．．．．．32Review．3
2、4Acknowledgement．43Artical。44萬方數據山東大學碩士學位論文TWEAK通過ERKl／2通路促進大鼠心肌成纖維細胞MMP2與I型膠原表達研究生：巨媛媛專業(yè)：內科學(心血管病)導師：隋樹建中文摘要背景：隨著經濟的發(fā)展及生活水平的提高，心血管疾病的發(fā)病率在我國呈現逐步增長的趨勢。有數據表明，心血管疾病是全球慢性病死亡的主要病因，其中，高血壓與卒中和心肌梗死的發(fā)生密切相關。左心室肥厚作為高血壓病的靶器官損害之一，是多種心血管疾病的獨立危險因素，造成心律失常、心衰、猝死等不良預后。
3、在左心室肥厚由代償轉變?yōu)槭Т鷥斏踔列乃ソ?，心肌纖維化發(fā)揮著重要作用。心肌纖維化主要表現為間質中膠原的合成增加和分解減少，膠原含量及結構的細微改變即可影響心室的僵硬度，進而影響心室的舒張功能。心肌組織中的基質金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)主要由心肌成纖維細胞分泌，介導心肌細胞外基質尤其是膠原的降解。MMPs的表達和活性增加，及與其抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑(tissueinhibitorofmetalloproteinases，TIMPs)的比例失衡是造成心
4、肌纖維化的直接原因。有證據表明，MMP2通過降解膠原蛋白、降解細胞間連接、水解并激活調控因子等機制促進心肌纖維化過程。除了機械應力、神經體液調節(jié)外，炎癥在心肌纖維化的進程中也起到重要作用。炎性因子TNF超家族成員除了發(fā)揮對腫瘤的殺傷作用及促炎反應外，也參與心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑(tumornecrosisfactor-likeweakinducerofapoptosis，TWEAK)是TNF超家族成員，在多種細胞、組織及器官中均有表達。在心血管系統(tǒng)中，TWEAK能通
5、過促進心肌細胞肥大、介導內皮細胞損傷、加速血管平滑肌細胞遷移、改變心肌細胞外基質成分等機制參與心肌梗死、擴張性心肌病、高血壓等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程。TWEAK萬方數據山東大學碩士學位論文被報道能夠促進心肌成纖維細胞增殖及膠原合成，該過程由P38通路介導。P38通路與ERKl／2(extracellularsignal—regulatedkinase1／2)通路、JNK(c-junn—terminalkinase)通路和ERK5通路同屬于絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedpr
6、oteinkinase，MAPK)家族，廣泛存在于真核細胞內。除P38通路外，ERKl／2通路被證實與心肌細胞肥大、心肌纖維化密切相關。因此，本研究旨在探索TWEAK能否通過ERKl／2通路調控心肌成纖維細胞(cardiacfibroblasts，CFs)I型膠原及MMP2的表達，進一步揭示TWEAK促進心肌纖維化的作用機制。目的：研究腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑調控大鼠心肌成纖維細胞表達基質金屬蛋白酶2及I型膠原的作用機制。方法：1．胰酶消化法分離培養(yǎng)新生大鼠原代CFs，免疫熒光法鑒定CFs。2
7、．利用Westemblot法檢測磷酸化ERKl／2(p．ERKl／2)的蛋白表達水平，從而確定重組人TWEAK(rhTWEAK)及ERKl／2通路抑制劑PD98059對CFs的最佳干預濃度及干預時間。3．采用real．timePCR以及Westernblot法檢測干預后MMP2及I型膠原的mRNA與蛋白表達水平。4．采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測不同處理對細胞增殖的影響。結果：1．CFs呈梭形或不規(guī)則多角形，胞體較大，有折光性。胞漿透明，胞核呈卵圓形，無自發(fā)性搏動。波形蛋白免疫熒光顯示，細胞抗
8、vimentin抗體表達為陽性。2．TWEAK及抑制劑PD98059對ERK蛋白的作用：1001ag／LTWEAK干預CFs顯著上調P．ERKl／2的蛋白表達，并呈時間、劑量依賴性。PD98059阻斷ERKl／2通路后能抑制P．ERKl／2蛋白的表達，并且PD98059濃度在51amol／L時達最大效應。3．TWEAK及抑制劑PD98059對MMP2mRNA與蛋白表達的調控：100}Lg／LTWEAK能顯著上調MMP2mRNA與蛋白表達水平，5Irtmol／LPD98059阻斷ER
