高活性發(fā)酵豆粕生產(chǎn)菌株篩選及其最佳發(fā)酵條件的分析

高活性發(fā)酵豆粕生產(chǎn)菌株篩選及其最佳發(fā)酵條件的分析

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1、蜊ffIIf『lf

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6、『JfI』Y1942386摘要摘要本論文以自然界中選育出的一株兼性厭氧條件下高產(chǎn)蛋白酶的枯草芽孢桿菌NCU646(眈c工.I_2ussU6tjns)作為主要發(fā)酵菌株,結(jié)合本實驗室保藏菌釀酒酵母NCU223(sacc^arDmycescereyIsjae)和植物乳酸桿菌NCUll6(.!ac亡06ac工_!.Ius)固態(tài)發(fā)酵豆粕以提高豆粕的飼用品質(zhì)。本論文采用了不同固態(tài)發(fā)酵方法進行發(fā)酵豆粕研究,獲得了發(fā)酵豆粕最佳工藝條件。本文主要進行了以下研究

7、:(1)豆粕發(fā)酵專用菌種選育技術的研究。分別對中外發(fā)酵豆粕、霉豆腐、醬油發(fā)酵原液等進行了厭氧條件下高產(chǎn)蛋白酶生產(chǎn)菌株的篩選。得到了高效發(fā)酵豆粕且性能穩(wěn)定的優(yōu)勢菌株NCU646。經(jīng)過生理生化鑒定和分子生物學鑒定,鑒定NCU646為兼性厭氧型枯草芽孢桿菌(如cj.2.2ussU6t』_IIs)。(2)NCU646固態(tài)發(fā)酵豆粕工藝的研究。通過k(34)正交試驗優(yōu)化發(fā)酵條件,得出NCU646單菌發(fā)酵豆粕的最佳發(fā)酵工藝條件為:NCU646的接種量(菌懸液培養(yǎng)到生長對數(shù)中期的質(zhì)量)為6.09/1009,料水比1

8、:0.8,發(fā)酵溫度為36℃,發(fā)酵時間為96h。在最佳發(fā)酵條件下,發(fā)酵后豆粕中總蛋白含量達到52.26%,小肽含量為發(fā)酵前的8.56倍達到14.55%,豆粕中胰蛋白酶抑制因子含量從25.0mg·1009。1降解到飼料標準規(guī)定含量以下的0.28mg·1009一。(3)混菌固態(tài)發(fā)酵豆粕工藝的研究。利用枯草芽孢桿菌NCU646、釀酒酵母NCU223和植物乳酸桿菌NCUll6進行混合發(fā)酵豆粕。分別進行了一步法發(fā)酵豆粕和二步法發(fā)酵豆粕的工藝研究。一步法發(fā)酵工藝:NCU646:釀酒酵母NCU223:植物乳酸桿菌N

9、CUll6=2:l:1(各菌懸液培養(yǎng)到生長對數(shù)中期的質(zhì)量比),接種量為6.09/1009(三種菌懸液培養(yǎng)到生長對數(shù)中期時按質(zhì)量比2:l:1的總質(zhì)量為6.Og),料水比l:O.8,發(fā)酵溫度為36℃,發(fā)酵時間為96h。豆粕發(fā)酵后總蛋白達到53.51%,小肽含量達到13.20%,有機酸含量達到2.19%,干樣pH值由6.89下降到5.32,胰蛋白酶抑制因子從25.0mg·1009。降解到O.28mg·1009~。二步法發(fā)酵工藝:NCU646:釀酒酵母NCU223:植物乳酸桿菌NCU116=2:1:l(各菌

10、懸液培養(yǎng)到生長對數(shù)中期的質(zhì)量比),接種量8.Og/1009(三種菌懸液培養(yǎng)到生長對數(shù)中期時按質(zhì)量比2:1:1的總質(zhì)量為8.09),料水比1:O.8,第一II摘要步在溫度為30℃下接入枯草芽孢桿菌和釀酒酵母發(fā)酵豆粕,發(fā)酵時間為72h;第二步在溫度為36℃下接入植物乳酸桿菌到第一步發(fā)酵豆粕中,發(fā)酵時間為48h。豆粕發(fā)酵后總蛋白達54.49%,小肽含量達到15.38%,有機酸含量達到2.09%,干樣pH值由6.89下降到5.42,胰蛋白酶抑制因子從25.Omg·1009d降解到O.18mg·1009一。(

11、4)誘變NCU646選育高活性發(fā)酵豆粕優(yōu)良菌種的研究。利用化學誘變劑亞基胍復合紫外線照射對NCU646進行誘變處理,得到突變菌NCU656。利用正交試驗方法對NCU656結(jié)合釀酒酵母NCU223和植物乳酸菌NCUll6一步法固態(tài)發(fā)酵豆粕的工藝進行研究。得到一步法最佳工藝為:NCU656:釀酒酵母CU223:植物乳酸桿菌NCUll6=3:2:l,接種量為4.Og/1009,料水比1:O.8,發(fā)酵溫度為36℃,發(fā)酵時間為120h。在該發(fā)酵條件下,發(fā)酵豆粕中總蛋白達到54.33%,小肽含量達到14.68%

12、,于樣pH值由6.89降為5.34,有機酸含量達到2.15%,胰蛋白酶抑制因子降解為O.24n培·1009~;利用正交試驗方法對NCU656混合釀酒酵母NCU223和植物乳酸菌NCUll6二步法固態(tài)發(fā)酵豆粕的工藝進行了研究。得到二步法最佳工藝為:NCU656:釀酒酵母NCU223:植物乳酸桿菌NCUll6=2:1:1,接種量為8.09/1009,料水比1:0.8,第一步在溫度為30℃下接入枯草芽孢桿菌和釀酒酵母發(fā)酵發(fā)酵豆粕,發(fā)酵時間為72h;第二步在溫度為36℃下接入植物乳酸桿菌到第一步發(fā)酵后豆粕中

13、,發(fā)酵時間為48h。在該發(fā)酵條件下,發(fā)酵豆粕中總蛋白達54.39%,小肽含量達到17.01%,有機酸含量達到2.10%,干樣pH值由6.89降到5.44。胰蛋白酶抑制因子降解到0.13mg·100百1。關鍵詞:發(fā)酵豆粕;菌種選育;枯草芽孢桿菌;一步法發(fā)酵;胰蛋白酶抑制因子;復合誘變:小肽轉(zhuǎn)化率IlIABSTRACTABSTRACTSoybeallmealhausbeenconcemasalligll.quali坶plantproteinsource,avarie博of

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