《植物成分分析》word版

《《植物成分分析》word版》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。

1、實(shí)驗(yàn)一、分離鑒定植物組織中的氨基酸目的意義層析分離技術(shù)（或稱色層分析技術(shù)）是一種物理分離技術(shù)，是利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)（如吸附力、分子大小和形狀、分子親和力、分子極性、分配系數(shù)等）的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，達(dá)到分離的目的。根據(jù)層析方法所依據(jù)的理化性質(zhì)的不同，層析技術(shù)可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析、排阻層析、親和層析等。根據(jù)固定相支持劑的質(zhì)地和形狀等的不同，層析技術(shù)可分為紙層析、薄層層析、薄膜層析、柱層析等。層析分離技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便，不需要很復(fù)雜的設(shè)備，樣品用量可大可小，故既可用于實(shí)驗(yàn)室的分離分析，又適用于工業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)品的分離制備。它與光學(xué)

2、儀器配合，可組成各種自動(dòng)化分離分析儀器，進(jìn)一步顯示了層析分離技術(shù)的優(yōu)越性。在生化技術(shù)領(lǐng)域里，層析技術(shù)已成為一項(xiàng)最常用的分離分析方法。此項(xiàng)技術(shù)可用于研究物質(zhì)組成和分離純化各種成分。通常用于分離分析氨基酸、核苷酸、糖類、激素、維生素等成分。其優(yōu)點(diǎn)是能夠分離與分析在組成、結(jié)構(gòu)及性質(zhì)上極為相似的物質(zhì)，設(shè)備簡(jiǎn)單，操作容易，樣品用量少，結(jié)果較準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谡莆諏游龇ǖ囊话阍砗筒僮骷夹g(shù)，學(xué)會(huì)氨基酸的鑒定方法。一、紙層析法（一）原理紙層析是分配層析的一種，即以分配系數(shù)的不同，使不同物質(zhì)在不同相中不同程度地分配，從而達(dá)到分離的目的。一種物質(zhì)在不同的溶劑中具有不同的溶解度。所謂分配

3、系數(shù)就是一種溶質(zhì)在兩種存在于同一系統(tǒng)而相互不溶的溶劑中溶解達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，溶質(zhì)在兩相中的濃度比值，通常用表示：各種物質(zhì)的分配系數(shù)在一定條件下是一個(gè)常數(shù)。將兩種溶劑中的一相用一種支持劑加以固定，稱為固定相。讓另一相從這相上流過(guò)，稱為流動(dòng)相。這樣，分配系數(shù)可表示為：紙層析是以濾紙作支持劑的分配層析。層析溶劑是選用有機(jī)溶劑和水組成的。由于濾紙纖維與水有較強(qiáng)的親和力，能吸附22％左右的水，而與有機(jī)溶劑的親和力很弱，它可以在紙的毛細(xì)管中流動(dòng)。因此，以水作固定相，而以與水不相溶的有機(jī)溶劑作流動(dòng)相。層析時(shí)，將濾紙的一端浸入展層劑中，有機(jī)溶劑就會(huì)連續(xù)不斷地通過(guò)點(diǎn)有樣品的原點(diǎn)處，使其中的

4、溶質(zhì)依據(jù)其本身的分配系數(shù)不斷地在兩相間進(jìn)行分配。分配的過(guò)程：一部分溶質(zhì)隨有機(jī)相移動(dòng)離開(kāi)原點(diǎn)而進(jìn)入無(wú)溶質(zhì)區(qū)，并進(jìn)行重新分配，即一部分溶質(zhì)從有機(jī)相又進(jìn)入水相。隨著有機(jī)相不斷向前移動(dòng)，溶質(zhì)不斷地在兩相間進(jìn)行可逆的分配，不斷向前移動(dòng)。各種物質(zhì)因其分配系數(shù)的不同，在兩相間分配的數(shù)量就不同，分配系數(shù)小的溶質(zhì)在流動(dòng)相中分配的數(shù)量多，向前移動(dòng)的速度快；而分配系數(shù)大的溶質(zhì)在固定相中分配的數(shù)量多，移動(dòng)的速度慢。所以各種溶質(zhì)在層析的過(guò)程中由于移動(dòng)的速度不同便可以彼此分開(kāi)。溶質(zhì)遷移的速度用遷移率表示，符號(hào)為。各種化合物在恒定的條件下，經(jīng)層析后都有其一定的值，即在層析圖譜中有一定的位置。借此可以

5、達(dá)到分離和鑒定的目的。決定值的因素主要是分配系數(shù)，而分配系數(shù)受以下因素的影響：1.物質(zhì)極性的大?。核臉O性很強(qiáng)，一般極性強(qiáng)的物質(zhì)容易進(jìn)入水相，非極性的物質(zhì)易進(jìn)入有機(jī)溶劑中。如側(cè)鏈含極性基團(tuán)的氨基酸易分配在水相中，值較小，而側(cè)鏈含非極性基團(tuán)的氨基酸易分配在有機(jī)相中，值較大。2.濾紙的質(zhì)地以及為水飽和的程度：濾紙的質(zhì)地必須均一，純凈，厚薄適當(dāng)，具有一定的機(jī)械強(qiáng)度，層析前應(yīng)為水和有機(jī)溶劑的蒸汽所飽和。3.溶劑的純度、pH值和含水量：pH值和含水量的改變可使氨基酸和展層劑的極性改變，值也隨之改變。4.層析的溫度和時(shí)間：溫度改變，使溶劑中有機(jī)相含水量改變，值也改變。當(dāng)所有條件相同

6、時(shí)，層析時(shí)間短，則值小。因此，層析過(guò)程中對(duì)以上影響因素要嚴(yán)格控制。（二）實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑1.實(shí)驗(yàn)材料：綠豆芽。2.儀器：吹風(fēng)機(jī)、層析缸、培養(yǎng)皿、毛細(xì)管、針線、尺子、曲別針、新華1號(hào)濾紙等。3.試劑：（1）標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液：0.1％的賴氨酸（Lys）、天冬氨酸（Asp）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酸（Glu）、脯氨酸（Pro）、苯丙氨酸（Phe）、纈氨酸（Val）、亮氨酸（Leu）及上述各種氨基酸溶液等體積的混合液。（2）展層劑及顯色劑：按正丁醇:95％乙醇:冰乙酸:水＝4:1:1:2配成展層劑后，再以其配成0.1％的水合茚三酮試劑。（三）操作步驟1.點(diǎn)樣：取新華1號(hào)濾紙

7、一張，于距一端2cm處用鉛筆畫一道直線，并均勻分出11個(gè)點(diǎn)，其中8個(gè)點(diǎn)分別點(diǎn)8種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸（各點(diǎn)4～5次），1個(gè)點(diǎn)點(diǎn)混合氨基酸（7～8次），2個(gè)點(diǎn)點(diǎn)樣品（7～8次）。樣品的點(diǎn)法是掰開(kāi)綠豆芽下胚軸，擠出一些汁液，用毛細(xì)管吸一些點(diǎn)樣即可。2.層析：取大小合適的層析缸一個(gè)，其底部放上直徑為10cm左右的培養(yǎng)皿。向培養(yǎng)皿中加入約1.5cm深的展層劑，蓋嚴(yán)，平衡20min。將點(diǎn)好樣的濾紙卷成筒狀，用曲別針或針線縫合固定兩點(diǎn)（注意不要使濾紙的兩邊重疊）。將濾紙點(diǎn)樣端朝下，點(diǎn)樣面向外放入培養(yǎng)皿中，蓋嚴(yán)層析缸，開(kāi)始層析。待展層劑前沿到達(dá)距上端3cm左右時(shí)