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1、流感病毒裂解疫苗LiuganBingduLiejieYimiaoInfluenzaVaccine（SplitVirion）,Inactivated本品系用世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的并經(jīng)國家藥品管理部門批準(zhǔn)的流感病毒株分別接種雞胚，經(jīng)培養(yǎng)、收獲病毒液，病毒滅活、純化、裂解后制成。用于預(yù)防本型病毒引起的流行性感冒。1基本要求生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原材料及輔料、水、器具、動(dòng)物等應(yīng)符合“凡例”有關(guān)要求。2制造2.1生產(chǎn)用雞胚毒種傳代和制備用雞胚應(yīng)來源于SPF雞群。疫苗生產(chǎn)用雞胚應(yīng)來源于封閉式房舍內(nèi)飼養(yǎng)的健康雞群，并選用9~11日齡無畸形、血管清晰、活動(dòng)的雞胚。2.2
2、毒種2.2.1名稱和來源生產(chǎn)用毒種為WHO推薦的甲型和乙型流行性感冒病毒株，經(jīng)檢定證明為WHO當(dāng)年推薦的病毒株或相似株。2.2.2種子批的建立應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。以WHO推薦并提供的流感毒株代次為基礎(chǔ)，傳代建立主種子批和工作種子批，至成品疫苗病毒總傳代不得超過5代。2.2.3種子批檢定主種子批應(yīng)做以下全面檢定，工作種子批應(yīng)至少進(jìn)行2.2.3.1-2.2.3.5項(xiàng)檢定。2.2.3.1鑒別試驗(yàn)血凝素型別鑒定：應(yīng)用相應(yīng)（亞）型流感病毒特異性免疫血清進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)證明其抗原性與推薦的病毒株相一致。2.2.3.2病毒滴度應(yīng)用雞胚
3、半數(shù)感染劑量法（EID50）檢查，病毒滴度應(yīng)不低于6.5LgEID50/ml。2.2.3.3血凝滴度采用血凝法檢測，血凝滴度應(yīng)不低于1：160。2.2.3.4無菌檢查依法檢查（附錄XIIA），應(yīng)符合規(guī)定。2.2.3.5支原體檢查依法檢查（附錄XIIB），應(yīng)符合規(guī)定。2.2.3.6外源性禽白血病病毒檢測用相應(yīng)（亞）型的流感病毒特異性性免疫血清中和病毒后，接種SPF雞胚細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，用酶聯(lián)免疫法檢測培養(yǎng)物，結(jié)果應(yīng)為陰性。2.2.3.7外源性禽腺病毒檢測用相應(yīng)（亞）型的流感病毒特異性性免疫血清中和病毒后，接種SPF雞胚肝細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，分別用適宜的血清學(xué)方法檢測其
4、培養(yǎng)物中的I型和III型禽腺病毒，結(jié)果均應(yīng)陰性。2.2.4毒種保存凍干毒種應(yīng)于－20℃以下保存，液體毒種應(yīng)于－60℃以下保存。2.3單價(jià)病毒原液2.3.1病毒接種和培養(yǎng)于雞胚尿囊腔接種經(jīng)適當(dāng)稀釋的工作種子批毒種，置33～35oC培養(yǎng)48~72小時(shí)。一次未使用完的工作種子批毒種，不得再回凍繼續(xù)使用。2.3.2病毒收獲篩選活雞胚，置2~8oC一定時(shí)間冷胚后，收獲尿囊液于容器內(nèi)。逐容器取樣進(jìn)行尿囊收獲液檢定。2.3.3尿囊收獲液檢定2.3.3.1微生物限度檢查菌數(shù)應(yīng)小于105CFU/ml，沙門氏菌檢測應(yīng)為陰性（附錄XIIG）。2.3.3.2血凝滴度按2.2.3.
5、3項(xiàng)進(jìn)行，應(yīng)不低于1：160。2.3.4尿囊收獲液合并每個(gè)收獲容器的含單型流感病毒的尿囊液檢定合格后可合并為單價(jià)病毒合并液。2.3.5病毒滅活在規(guī)定的蛋白質(zhì)含量范圍內(nèi)進(jìn)行病毒滅活。單價(jià)病毒合并液中加入終濃度不高于0.2mg/ml的甲醛，置適宜的溫度下進(jìn)行病毒滅活，滅活到期后，每個(gè)病毒滅活容器應(yīng)立即取樣，分別進(jìn)行病毒滅活驗(yàn)證試驗(yàn)，并進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素含量測定。（也可在純化后或純化過程中加入適宜濃度的甲醛溶液進(jìn)行病毒滅活）。2.3.6濃縮及純化2.3.6.1超濾濃縮采用離心或其他適宜的方法，將單價(jià)病毒合并液進(jìn)行澄清后，采用超濾法將病毒液濃縮至適宜蛋白質(zhì)含量范圍。濃
6、縮后的病毒液應(yīng)取樣進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素含量測定。2.3.6.2純化超濾濃縮后的單價(jià)病毒合并液可采用柱色譜法或蔗糖密度區(qū)帶離心法進(jìn)行純化，采用蔗糖密度區(qū)帶離心法法進(jìn)行純化的應(yīng)用超濾法去除蔗糖。純化后取樣進(jìn)行蛋白質(zhì)含量測定。2.3.7病毒裂解應(yīng)在規(guī)定的蛋白質(zhì)含量范圍內(nèi)進(jìn)行病毒裂解。將純化后的單價(jià)病毒合并液中加入適宜濃度的裂解劑，在適宜條件下進(jìn)行病毒裂解。2.3.8裂解后純化采用柱色譜法或蔗糖密度梯度離心法以及其他適宜的方法進(jìn)行病毒裂解后的再純化，采用蔗糖密度區(qū)帶離心法進(jìn)行純化的應(yīng)用超濾法去除蔗糖。超濾后的病毒液取樣進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素含量測定和微生物限度檢查，微生物限度檢
7、查菌數(shù)應(yīng)小于10CFU/ml。2.3.9除菌過濾純化后的病毒裂解液經(jīng)除菌過濾后，并加入適宜濃度的硫柳汞作為防腐劑，即為單價(jià)病毒原液。2.3.10單價(jià)病毒原液檢定按3.1項(xiàng)進(jìn)行。2.3.11保存于2～8℃保存。2.4半成品2.4.1配制根據(jù)各單價(jià)病毒原液的血凝素含量，將各型流感病毒按同一血凝素含量進(jìn)行半成品配制，（血凝素配制量可在30-36ug/ml范圍內(nèi)，每年各型別流感病毒株應(yīng)按同一血凝素含量進(jìn)行配制），可補(bǔ)加適宜濃度的硫柳汞作為防腐劑，即為半成品。2.4.2半成品檢定按3.2項(xiàng)進(jìn)行。2.5成品2.5.1分批應(yīng)符合“生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。2.5.2分裝應(yīng)
8、符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定。2.5.3規(guī)格本品為每瓶（支）
