流感裂解疫苗純化及裂解工藝的優(yōu)化 (1)

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1、#36#中國(guó)生物制品學(xué)雜志2008年1月第21卷第1期ChinJBiologicalsJanuary2008,Vo1.21No.1中國(guó)圖書分類號(hào)R37311+3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1004-5503(2008)01-036-04=預(yù)防制品>流感裂解疫苗純化及裂解工藝的優(yōu)化11112111楊劉紅巖馬波郭仁彭建新謝飛侯峰代云波=摘要>目的優(yōu)化大規(guī)模生產(chǎn)的流感病毒裂解疫苗的純化及裂解工藝。方法比較凝膠層析和蔗糖密度梯度超速離心的純化效果,以及TritonX-100和去氧膽酸鈉兩種裂解劑在不同條件下的裂解效果。結(jié)果層析法純度稍高于蔗糖密度梯度超速

2、離心法,而蔗糖密度區(qū)帶超速離心法的收率優(yōu)于層析法。TritonX-100的裂解效果優(yōu)于去氧膽酸鈉,裂解劑濃度為0.5%或0.8%,裂解3或4h,裂解率達(dá)90%以上。疫苗在4e保存1年后,所有檢測(cè)項(xiàng)目均合格,4e保存18個(gè)月和37e保存28d后,HA含量仍保持在30Lg/ml以上。結(jié)論已建立了切實(shí)可行的流感病毒裂解疫苗規(guī)模生產(chǎn)的純化及裂解工藝。=關(guān)鍵詞>流感裂解疫苗;純化;裂解OptimizationofProcedureforPurificationandLysisofInfluenzaVirusVaccinevvYANGZhe,LIUH

3、ong-yan,MABo,etal(WalvaxBioTechCo.Ltd,Kunming650018,China)=Abstract>ObjectiveTooptimizetheprocedureforpurificationandlysisofinfluenzavirusvaccine.MethodsComparethepurificationefficaciesbygelfiltrationchromatographyandbysucrosedensitygradientcentrifutgation,aswellasthelysi

4、sefficacieswithTritonX-100andwithsodiumdeoxycholateundervariousconditions.ResultsThepurityofsplitinfluenzavaccineafterpurificationbygelfiltrationchromatographywasslightlyhigherthanthatbysucrosedensitygradientultracentrifugation,whiletherecoveryofvaccinebythelatterwashighe

5、rthanthatbythefor-mer.TritonX-100showedgoodlysisefficacyascomparedwithsodiumdeoxycholate.AfterlysiswithTritonX-100atafinalconcentrationof0.5%or0.8%for3or4h,morethan90%ofinfluenzavaccinewaslyzed.Afterstorageat4efor12months,allthequalityindexesofthepurifiedvaccinemettherele

6、vantrequirements.However,afterstorageat4efor18monthsorat37efor28d,theHAcontentofvaccinewasstillmorethan30Lg/ml.ConclusionApracticalandfeasibleprocedureforpurificationandlysisofinfluenzavaccinewasdeveloped.=Keywords>Splitinfluenzavirusvaccine;Purification;Lysis本文根據(jù)WHO規(guī)程有關(guān)規(guī)

7、定和5中國(guó)藥典6三A3)和B/JiangSu/10/2003株(簡(jiǎn)稱B)。部(2005版)相關(guān)規(guī)定,并參閱文獻(xiàn),對(duì)流感疫苗裂113試劑及儀器解病毒抗原超速密度區(qū)帶離心及凝膠層析純化病毒SerazymOvalbuminELISA試劑盒購自SeramunD-i的具體方法進(jìn)行了優(yōu)化,建立了有效的規(guī)模化生產(chǎn)agnosticaGmbH;牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品購自中國(guó)藥品生疫苗的裂解和純化工藝。物制品檢定所;蛋白純化儀AKTAexplorer100為Phar-macia產(chǎn)品;介質(zhì)Sepharose4FF為Pharmacia產(chǎn)品。11材料與方法114病毒培

8、養(yǎng)及純化111雞胚取工作種子,以稀釋度10-3接種于11日齡的普種子批制備使用9~11日齡SPF雞胚,來自北通雞胚,經(jīng)35e培養(yǎng)72h后,置4e冷胚過夜,收獲京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司;