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1、從本學科出發(fā)，應著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果丙型肝炎病毒準種特性的研究進展丙型病毒性肝炎(丙肝)是一種廣泛傳播的疾病，是導致慢性病毒性肝炎、肝炎肝硬變、肝細胞癌(HCC)的主要病因之一，而這些病變形成與其病原丙型肝炎病毒和放射自顯影，根據(jù)其SSCP條帶數(shù)目及位置不同則可分辨出序列單個堿基和構(gòu)型改變，由此來判斷體內(nèi)準種株的復雜程度。③異源雙鏈泳動分析法(Heteroduplexmobilityassay,HMA
2、/heteroduplexgelshiftanalysis，GSA),亦稱異源雙鏈示蹤檢測法（Heteroduplextrackingassay,HTA)〔10,18,19〕。此法早期主要用于艾滋病病毒異質(zhì)性研究，主要原理是基于DNA分子的變性和復性過程。在DNA經(jīng)過變性后復性時，如反應系統(tǒng)中存在兩種或兩種以上具有一定同源性的核酸分子鏈，不同來源的兩鏈同源區(qū)可配對形成雙鏈，此即異源雙鏈;異源雙鏈內(nèi)由于存在堿基錯配或不配區(qū)域，分子構(gòu)象發(fā)生了改變，不同于同源雙鏈，通過非變性的PAGE課題份量和難易程度
3、要恰當，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當?shù)墓烙?。從本學科出發(fā)，應著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果，同源性越高，泳動就越快，反之則慢。比較而言，第一種方法結(jié)果直接而可靠，但較原始且費力費時，直接PCR產(chǎn)品克隆和序列分析往往不能代表HCV準種株的真實組成，雖容易鑒別出優(yōu)勢序列，但小的克隆很可能被忽略掉。PCR-SSCP法應用較廣，但對低于5%的準種株病毒群體亦有可能檢測不
4、到，而且操作煩瑣〔20〕。相比之下，HMA法操作相對簡單省時，可用于基因亞型的測定。這些方法學上的差異在一定程度上可能決定了各學者在研究HCV準種特性時某些結(jié)論的不一致，所以尋求一種更準確、簡便而重復性較好的方法是必需的。 3 HCV準種的優(yōu)勢株與劣勢株 有研究認為〔21，22〕，對HCV準種株群體變化可能有三種解釋:①HCV變異是HCV感染人體后隨時間變化而自發(fā)產(chǎn)生的;②病情嚴重時，HCV復制更加活躍，復制期間“易錯配”(Error-prone)的RNA聚合酶導致了序列變異;③正性免疫選擇壓
5、力(Positiveimmuneselectivepressure)作用所致病毒適應環(huán)境的結(jié)果。因此，在大量的準種株中，可能有一個或幾個主序列，主序列代表特定環(huán)境下最適應的基因群。主序列與其他序列的關(guān)系也就構(gòu)成了復雜的“優(yōu)勢株”與“劣勢株”關(guān)系，而且很可能有序列優(yōu)勢株和功能優(yōu)勢株之別，它們與HCV感染后疾病的轉(zhuǎn)歸關(guān)系尚不清楚。Gretch等〔19〕采用HTA方法觀察了5例HCV-1型感染患者肝移植前后血清中HCVHVR1準種及優(yōu)勢株(Majorvarants)的變化。發(fā)現(xiàn)3例移植后再發(fā)嚴重肝病的患
6、者，其移植前存在的優(yōu)勢株在移植后即出現(xiàn)了明顯的復制增殖并伴隨病情從急性發(fā)展課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當?shù)墓烙?。從本學科出發(fā)，應著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果為慢性;相反，在2例移植后發(fā)展為無癥狀的感染者體內(nèi)，雖然病毒滴度仍高，但移植正常肝后原來的優(yōu)勢序列很快消失，而在0d左右即出現(xiàn)了新的HVR1準種株，序列分析發(fā)現(xiàn)，新的病毒準種株實際上
7、來源于移植前就存在的次要變異株（＜5%HVR克隆)。作者認為HCV感染患者血清中有一種或多種優(yōu)勢變異株存在，與同時存在的其它次要株之間關(guān)系復雜，它們在肝組織嗜性、致病能力、肝外復制及免疫壓力選擇作用方面可能均不一致，從而聯(lián)系到不同的疾病過程。國內(nèi)潘文勝等〔23〕對兩例HCV持續(xù)感染患者5年的HVR基因變異研究發(fā)現(xiàn):①HVR的變異具有高度復雜性，但不是雜亂無章，而是有規(guī)律地朝著一個方向發(fā)展，不管是感染早期的優(yōu)勢克隆或劣勢克隆，隨著病程發(fā)展，絕大多數(shù)均會消失，取而代之的是新的優(yōu)勢克隆;②HVR變異存在
8、優(yōu)勢克隆劣轉(zhuǎn)的現(xiàn)象，可能由于免疫系統(tǒng)首先攻擊的主要對象是優(yōu)勢克隆，逃避免疫清除的劣勢克隆可優(yōu)勢化，這也解釋了按優(yōu)勢克隆合成的多肽沒有完全保護性的現(xiàn)象?！CV準種株的分布 有研究表明，HCV可在肝外組織復制，Sakamoto等〔24〕研究曾發(fā)現(xiàn)不同丙肝的臨床病程中，患者肝組織及血漿中的HCV準種株并無明顯差異。但目前課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實驗條件等要有恰當?shù)墓烙?。從本學科出發(fā)，應著重選對國民經(jīng)濟具有一定實用價值和理論
