加味四逆散對(duì)肝纖維化大鼠肝組織ⅰ，ⅲ型膠原mrna影響的研究

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1、從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見(jiàn)解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果加味四逆散對(duì)肝纖維化大鼠肝組織Ⅰ，Ⅲ型膠原mRNA影響的研究作者：鄭旭銳，韋永紅，周莉英，孫守才，宇文亞【摘要】目的觀察加味四逆散對(duì)肝組織Ⅰ，Ⅲ型膠原mRNA影響，探討其抗肝纖維化的藥理機(jī)制和作用。方法采用二甲基亞硝胺腹腔注射制備大鼠肝纖維化模型，加味四逆散灌胃給藥，采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)各組大鼠肝組織Ⅰ，Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的水平。結(jié)果加味四逆散能明顯降低肝纖維化大鼠肝組織Ⅰ，Ⅲ型膠原的含量，與病理模型組比較有顯著性差異。

2、結(jié)論加味四逆散可有效的減少肝組織Ⅰ，Ⅲ型膠原的生成，對(duì)肝纖維化有肯定的治療作用?！娟P(guān)鍵詞】加味四逆散；肝纖維化；Ⅰ型膠原；Ⅲ型膠原TheEffectsofJiaWEiSiNiSanonExpressionofCollagenⅠ,ⅢofHepaticFibrosisinRatsAbstract：ObjectiveThemechanismofChineseHerbailcompoundJLAWEISINISANintreatinghepaticfibrosiswerefurtherexploredandstudiedbyobservingtheexpression

3、ofCollagenⅠandⅢCollagenmRNAinratfibrosismodelwasinducedbygroupsoftreatmentwerefedwithJWSNSImRNAandCollagenIIImRNAwere課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對(duì)實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見(jiàn)解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果detectedinliversampleswithRTpathologicalex

4、amination,theJWSIStreatmenthadsignificantlyreversedDMN-inducedliverJWSIStreatmentgrouptheexpressionofcollagenⅠ，ⅢinliverwasmarkedlyreducedrespectivelyaccordingtoRTPCRanalysisascomparedwithmodelgroup(PKeywords：JWSNS;Hepaticfibrosis;CouagonⅠ;CouagenⅢ　　加味四逆散是治療慢性病毒性肝炎的有效經(jīng)驗(yàn)方，既往的臨床觀察和動(dòng)物實(shí)

5、驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)該方具有良好的防治肝纖維化作用［1～3］。本實(shí)驗(yàn)采用二甲基亞硝胺腹腔注射誘導(dǎo)肝纖維化大鼠動(dòng)物模型，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠肝組織中I,Ⅲ型膠原mRAN表達(dá)，探討加味四逆散抗肝纖維化的作用機(jī)制?！　?材料動(dòng)物SD大鼠46只，雄性，清潔級(jí)，體重g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)進(jìn)。動(dòng)物合格證號(hào)：軍醫(yī)動(dòng)字第XX2020號(hào)。藥品及試劑加味四逆散煎劑等藥組成，由陜西中醫(yī)學(xué)院附院藥房購(gòu)進(jìn)，經(jīng)本院藥物鑒定教研室鑒定無(wú)偽劣品。藥物加水浸泡常規(guī)煎煮，過(guò)濾，水浴蒸發(fā)至每毫升含生藥，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。秋水仙堿、TRIzol課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二

6、年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對(duì)實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見(jiàn)解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果Regent(Invitrogen公司)、RTPCRKit、二甲基亞硝胺。　　2方法.1動(dòng)物模型制備大鼠在適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)選取8只作為空白對(duì)照組，其余38只均用DMN以10ml/kg體重腹腔注射，1次/d，每周連續(xù)d，連續(xù)4周。.2分組4周造模結(jié)束后，38只大鼠共死亡8只，死亡率為%，將剩余30只造模大鼠隨機(jī)分為：B組10只；C組10只；D組10只。

7、.3給藥A，B組以生理鹽水ml/只灌胃；C組以秋水仙堿mg/kg體重灌胃；D組以加味四逆散煎劑10ml/kg體重灌胃。以上各組用藥均1次/d，連續(xù)用藥30d后結(jié)束。.4標(biāo)本制作實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取部分新鮮肝組織用10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚μm。.5普通病理組織學(xué)觀察參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病寄生蟲(chóng)病分會(huì)制定的《病毒性肝炎防治方案》，病理組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：正常肝臟或無(wú)明顯膠原纖維增生為“-”級(jí)；膠原纖維增生，中央靜脈和匯管區(qū)有少量纖維索放散延伸，但無(wú)間隔形成為“+”級(jí)；膠原纖維增生，中央靜脈和匯管區(qū)結(jié)締組織變厚，由此向四周伸出纖維索，形成不完全間隔為“++”級(jí)；膠

8、原纖維大量增生，有個(gè)別菲薄的完全間隔形