我國布魯氏菌病病原學診斷方法研究概況_1

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1、從本學科出發(fā)，應著重選對國民經濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果我國布魯氏菌病病原學診斷方法研究概況布氏菌病是難以分離培養(yǎng)和鑒定的細菌，正確的病原學診斷，可為布氏菌病的防治工作和疫區(qū)分類提供可靠的依據。隨著科學技術的發(fā)展，經過多年的研究和探討，已建立了多種布氏菌病病原學診斷方法，并已達到分子診斷水平。1DNAG+CMOL％含量的測定及DNA同源性分析在布氏菌病病原學診斷中的應用郭秀蘭利用熱變形方法，對不同種布氏菌的DNA分子中G+CMOL％進行測定，證實布氏菌DN

2、A分子中G+C含量非常相似［1］。王曉英對傳統(tǒng)的熱變性溫度法測Tm值加以改進，測得值與文獻［1］相符［2］。吳從雅以液相復性速率分子雜交法測23株布氏菌及大腸桿菌K12、綠膿桿菌、痢疾桿菌、耶爾森氏菌O：9、鼠傷寒桿菌等5株對照菌及5株可疑布氏菌的DNA與布氏菌DNA雜交率。證實布氏菌屬內細菌具有高度同源性［3］。而郭秀蘭對6種不同型布氏菌做了同源性測定，證明布氏菌6個種不同型間DNA同源率%～％，是高度同源的［4］。利用熱變性溫度法測定布氏菌G+C含量和DNA雜交技術測定其同源性，不受菌齡、外環(huán)境變化的影響課題份量和難易程度要恰當

3、，博士生能在二年內作出結果，碩士生能在一年內作出結果，特別是對實驗條件等要有恰當的估計。從本學科出發(fā)，應著重選對國民經濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果，且穩(wěn)定、可靠、重復性好。為鑒定非典型及變異布氏菌提供了科學可靠的方法［5］。布氏菌外膜蛋白的研究布氏菌外膜蛋白分3大類，第1組分子量為88～94KD，第2組分子量為35～40KD，第3組分子量為25～30KD。武素懷等用兩性離子去污劑從牛、羊、豬種布氏菌的光滑型、粗糙標準型、非典型株中提出了外膜蛋白。利用SDS-

4、PAGE方法，對布氏菌外膜蛋白進行了研究，發(fā)現了布氏菌外膜蛋白的某些成分有非常相似的電泳帶類型。其中微孔蛋白的三聚體及解聚后所形成的單體存在形式不同，反映在SDS-PAGE圖譜上的帶形具有種的特異性［6］，這為布氏菌種間鑒定提供了一種新手段［7］。卿燕等報道，用布氏菌外膜蛋白抗原，對142份急、慢性期布氏菌病患者血清做免疫酶斑點試驗。結果表明，敏感性、特異性和操作程序均優(yōu)于ELISA，可供大量布氏菌病血清檢查用。同時所采用的外膜蛋白抗原為診斷粗糙型及非典型布氏菌引起的布氏菌病提供了廣譜抗原，用于布氏菌病的實驗室診斷［８］。布氏菌染色

5、體DNA的酶切分析課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內作出結果，碩士生能在一年內作出結果，特別是對實驗條件等要有恰當的估計。從本學科出發(fā)，應著重選對國民經濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果用核酸限制性內切酶處理細菌DNA，所得片段的電泳圖用以區(qū)別細菌的種，此法也被用于布氏菌的DNA分析［9］。唐瀏英對布氏菌1330S、16M、544A染色體DAN最適酶切條件進行了研究，探討了影響限制性內切酶對DNA消化的因素［10］。李元凱利用HindIII、BgII、Ec

6、oRI種酶對16M、544A和8株非典型布氏菌株的DNA片段進行消化，證明3種酶能將以上菌株切開，但非典型菌株之間、非典型菌株與標準菌株之間均未看出明顯差別［11］。用核酸限制性內切酶圖譜是不能區(qū)別布氏菌的種和型，或很難區(qū)別。單克隆抗體的制備及在布氏菌病病原學診斷中的應用課題份量和難易程度要恰當，博士生能在二年內作出結果，碩士生能在一年內作出結果，特別是對實驗條件等要有恰當的估計。從本學科出發(fā)，應著重選對國民經濟具有一定實用價值和理論意義的課題。課題具有先進性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果魯齊發(fā)等應用雜交瘤技

7、術獲得了兩種抗布氏菌表面抗原A和M的單克隆抗體15及58。這兩種抗體初步可對牛種與羊種布氏菌1型及其他一些生物型菌相鑒別［12］。同時還應用了犬種和綿羊附睪種布氏菌單克隆抗體對不同種型布氏菌株進行檢測，證明兩種單克隆抗體對粗糙型布氏菌有特異性，可用于粗糙型與光滑型布氏菌的鑒別，特別是采用ELISA對粗糙型布氏菌的確定，不僅可做定性或定量檢測，而且敏感性明顯高于凝集反應［13］。金根源等使用反向單克隆抗體酶聯(lián)免疫法檢測用布氏菌感染小鼠后1、3、6個月其臟器中抗原存在情況，同時分離細菌及作血清學檢查。結果表明，反向單克隆抗體酶聯(lián)免疫法檢

8、測抗原陽性高，并有較強的特異性，此法不但可以提示受感染者的保菌情況，并且比細菌分離法敏感等優(yōu)點［14］。布氏菌染色體基因庫的建立劉興漢等采用PBR328載體，經過幾輪工作后，建立了布氏菌強毒株M28染色體基因庫，并對質粒載體和噬菌體載