hplc測(cè)定酚類化合物實(shí)驗(yàn)報(bào)告

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1、實(shí)驗(yàn)題目：液相色譜測(cè)定酚類化合物實(shí)驗(yàn)報(bào)告環(huán)境工程劉鵬12333511.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）了解儀器各部分的構(gòu)造和功能及分析的原理（2）掌握樣品、流動(dòng)相的處理、儀器的維護(hù)等基木知識(shí)（3）學(xué)會(huì)簡(jiǎn)單樣品的分析操作過程（4）掌握HPLC分析的定性、定量方法2.基本原理高效液相色譜儀以液體作為流動(dòng)相，并采用顆粒極細(xì)的高效固定相的主色譜分離技術(shù)，在基本理論方面與氣相色譜沒有顯著不同，它們之間的重大差別在于作為流動(dòng)相的液體與氣體Z間的性質(zhì)差別。與氣相色譜相比，高效液相色譜對(duì)樣品的適用性強(qiáng)，不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的

2、限制，可以彌補(bǔ)氣相色譜法的不足。對(duì)于酚類化合物的測(cè)定，其基本原理是這樣的：先用固相小柱吸附水中酚類化合物，然后用溶劑洗脫，經(jīng)氮吹氣濃縮至一定體積后，用反相高壓液相色譜法分析。在反相色譜柱上以甲醇/（水+乙酸）為流動(dòng)相把經(jīng)預(yù)處理的酚類化合物分離，用二極陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器，測(cè)定各種酚的峰高或峰面積，以外標(biāo)法定量。3.儀器與試劑3?1儀器：高效液相色譜儀：可編程紫外檢測(cè)器微量注射器：5011L、100UL色譜柱：C18或C8柱化學(xué)工作站尖底濃縮瓶:10ml具刻度富集柱3?2試劑：流動(dòng)相：甲醇/高純水（

3、需①0.22um濾膜過濾）標(biāo)準(zhǔn)物：六種酚類混合物洗脫液：正己烷、四氫U夫喃（需重蒸）硫酸冰醋酸無水亞硫酸鈉4.所用儀器的主要組件（1）高壓輸液泵V主要部件之一，壓力:150X105?350X105Pa。V為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（＜10um）,液體的流動(dòng)相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)Z-o▼應(yīng)具冇壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性。（2）梯度淋洗裝置外梯度（高壓梯度）：用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)

4、入色譜柱。內(nèi)梯度（低壓梯度）：一臺(tái)高壓泵，通過比例調(diào)節(jié)閥，將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵屮混合。（3）進(jìn)樣裝置流路屮為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置。（4）高效分離柱柱體為直形不銹鋼管，內(nèi)徑1?6mm,柱長(zhǎng)5?40cm。發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。(5)液相色譜檢測(cè)器I紫外檢測(cè)器應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。特點(diǎn)：靈敏度高，線形范圍寬；流通池可做得很小(ImmXIOmm,容積8uL)；對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感；波長(zhǎng)口J選，易于操作；口J用于梯

5、度洗脫。II光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器:1024個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立休譜圖。III示差折光檢測(cè)器除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器?？蛇B續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度成止比。IV熒光檢測(cè)器高靈敏度，高選擇性。對(duì)多環(huán)芳坯，維生素B、黃曲霉素、嚇咻類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、笛類化合物等有響應(yīng)。1.數(shù)據(jù)處理(1)原始數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)據(jù)濃度(ppm)保留時(shí)間(min)峰而積峰高峰寬25.31423.82.20.159845.32144

6、.64.60.148165.33771.670.155885.33393.69.30.1537(2)數(shù)據(jù)處理①根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，做岀峰面積隨濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線。2,4-二氯苯酚預(yù)期保留時(shí)問：5.333DADIF,Sig=295z16Ref=360,100相關(guān)性：0.99936殘留標(biāo)準(zhǔn)誤差：1.53250公式：y=mx+bm:11.74987b:-2.70787e-lx:含量y：峰高②根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算實(shí)際單標(biāo)屮的物質(zhì)濃度單標(biāo)為8ppm的標(biāo)樣物質(zhì)實(shí)你濃度：C=7.990ppm