高速逆流色譜與微波輔助萃取分離純化側(cè)柏中的黃酮類化合物 畢業(yè)論文

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1、贛南醫(yī)學(xué)院2007屆畢業(yè)生論文高速逆流色譜與微波輔助萃取分離純化側(cè)柏中的黃酮類化合物學(xué)校名稱：贛西醫(yī)學(xué)院學(xué)生姓名：專業(yè)：藥學(xué)學(xué)號(hào)：班級(jí)：03藥學(xué)本科班完成日期：高速逆流色譜與微波輔助萃取分離純化側(cè)柏中的黃酮類化合物摘要首次采用高速逆流色譜儀TBE2300A與微波輔助萃取對(duì)側(cè)柏藥材中的活性黃酮類化合物進(jìn)行分離純化。實(shí)驗(yàn)過程中：微波輔助萃取，溫度80℃，時(shí)間29min，功率800W;高速逆流色譜提取，對(duì)溶劑系統(tǒng)和參數(shù)條件進(jìn)行系統(tǒng)的優(yōu)化,獲得較好的分離條件,溶劑系統(tǒng):正丁醇-乙酸乙酯-正己烷-水(6∶1∶

2、1∶12,V/V),上相(有機(jī)相)為固定相,下相(水相)為流動(dòng)相,反相洗脫；進(jìn)樣濃度:20mg/mL；進(jìn)樣體積:20mL；流速:3.0mL/min；轉(zhuǎn)速:850r/min。進(jìn)一步分離獲得四種高純度黃酮類化合物,經(jīng)薄層色譜鑒定,分別為A類黃酮、B類黃酮、C類黃酮、D類黃酮，但其具體結(jié)構(gòu)尚待確定。關(guān)鍵詞高速逆流色譜微波萃取　側(cè)柏葉　黃酮類化合物1引言側(cè)柏葉為柏科(Cupressaceae)植物側(cè)柏Biotaorientalis(L.)Endl.的干燥嫩枝葉,側(cè)柏別名扁柏、香柏、片柏、片松。常綠喬木,多為

3、栽培,除青海、新疆外,全國均有分布且為我國特產(chǎn)。側(cè)柏葉氣清香,味苦澀、微辛。具有涼血止血、清肺止咳功效,在臨床上常用于治療出血癥、風(fēng)濕痹痛、高血壓、咳喘等。目前對(duì)側(cè)柏葉的研究主要是關(guān)于其揮發(fā)油研究和總黃酮的研究，部分是關(guān)于其提取工藝的研究探索。其中對(duì)側(cè)柏葉黃酮化合物研究有:炮制研究、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究、化學(xué)成分研究（揮發(fā)油、黃酮、鞣質(zhì)、無機(jī)元素）、藥理研究（止血作用、抗炎作用、抗腫瘤活性、）、臨床研究。目前文獻(xiàn)報(bào)道側(cè)柏葉的主要成分是黃酮類化合物,而且主要針對(duì)黃酮類化合物的含量測定,從其中提出的單體化合物只

4、有對(duì)槲皮素和槲皮苷的報(bào)道。而黃酮類化合物成分甚多,不能只局限于槲皮素和槲皮苷,故對(duì)側(cè)柏葉中黃酮類成分的研究有待進(jìn)一步深入。另外，對(duì)側(cè)柏葉提取分離方法的主要文獻(xiàn)報(bào)道有：微波輔助萃取法、超臨界流體萃取(SFE)、索氏提取法、熱回流法、冷浸法、超聲波法、水蒸汽蒸餾法、滲漉法、加壓逆流提取法、旋流提取法、水提法、固相微萃取法、高壓液相法、高速逆流色譜法、柱色譜法、重結(jié)晶法等。其中都是單獨(dú)用到了微波輔助萃取法或高速逆流色譜法，未見關(guān)于兩者聯(lián)用提取分離側(cè)柏葉黃酮化合物的報(bào)道。高速逆流色譜(high-speedc

5、ounter-currentchromatography,HSCCC)是一種基于液-液多級(jí)逆流萃取建立的色譜體系，以輕巧的聚四氟乙烯螺旋管作分離柱，在行星式運(yùn)動(dòng)中連續(xù)地完成整個(gè)分配、傳遞、分離過程。無固相載體，避免了待分離樣品與固相載體表面產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)而變不可逆吸附；分辨率高，可制備純品；可采用正向或反向的連續(xù)洗脫、步級(jí)洗脫、梯度洗脫等方式；可采用多種多樣的溶劑系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)物質(zhì)的對(duì)流分配；能在一個(gè)流程中分離復(fù)雜樣品中極性差異極大的各個(gè)組分，特別是能有效地分離強(qiáng)極性的組分；儀器及試劑成本明顯低于高效液相色

6、譜(highperformanceliquidchromatography,HPLC),適用于制備高純度、高附加值的化合物。近20年來HSCCC在生物化學(xué)、醫(yī)藥學(xué)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境、材料、化工、海洋生物等眾多領(lǐng)域成功應(yīng)用。因HSCCC可采用不同物化特性的溶劑體系和多樣性的操作條件，具有較強(qiáng)的適應(yīng)性，為從復(fù)雜的天然產(chǎn)物粗制品中提取不同特性(如不同極性)的有效成分提供了有利條件，因此在80年代后期，在世界范圍內(nèi)的“回歸大自然”浪潮的席卷下，HSCCC被大量用于天然產(chǎn)物化學(xué)成分的分析和制備分離。將HSCCC用于

7、天然產(chǎn)物分離，一方面可以在高類別天然藥物新藥的研發(fā)中，逐級(jí)分離制備活性部位或活性成分，配合活性跟蹤與人藥部位的設(shè)計(jì)；另一方面可以配合高類別中藥新藥申報(bào)工作，制備必需的高純度指標(biāo)成分和必需控制的雜質(zhì)成分。本文探索了丹參脂溶性成分和雪蓮黃酮的HSCCC分離條件。高速逆流色譜法分離的優(yōu)點(diǎn)：首先,它不用固態(tài)支撐體,不存在樣品組分的吸附、變性、失活、拖尾等現(xiàn)象,節(jié)省了材料和溶媒消耗；其次,它操作簡便,重現(xiàn)性好,分離量較大,分離效率高,分離時(shí)間短,一般幾個(gè)小時(shí)即可完成一次分離；此外,有廣泛的液一液分配體系可供選

8、擇,體系更換方便、快捷；它的進(jìn)樣量大,這對(duì)于樣品的純化制備顯示出很大的優(yōu)勢。微波萃取(MicrwaveExtraction,M)是產(chǎn)生在分析化學(xué)研究的基礎(chǔ)上的，是制備分析樣品的有效方法之一。采用微波萃取法制備樣品，具有時(shí)間短、節(jié)省試劑、制樣精度高、回收率高等優(yōu)點(diǎn)。微波萃取技術(shù)是微波技術(shù)與萃取技術(shù)相結(jié)合產(chǎn)生的新技術(shù)。該技術(shù)最早研究開始于1986年，匈牙利學(xué)者Can-zlerk.研究發(fā)展了用微波萃取法從土壤、種子、食品、飼料中分離各類化合物的新技術(shù)。隨著技術(shù)的不斷完善，微