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《rhil-1α、1，25-(oh)-%2c2-d-%2c3-對人牙周膜成纖維細胞表達rankl和opg影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、rhlL．1a、1，25．(oH)2D3對人牙周膜成纖維細胞表達RANKL和OPG的影響中文摘要骨代謝是由成骨細胞的骨形成與破’胃’細胞的骨吸收之間構(gòu)成的動態(tài)平衡過程，骨代謝平衡的維持不僅受很多調(diào)節(jié)因素如機械力、酶等作用，還受細胞本身活動的影響。在牙周組織中，參與牙槽骨改建的功能細胞除成骨細胞和破骨細胞外，還有一種特殊的細胞牙周膜細胞。牙周膜細胞是一組有異質(zhì)性的細胞群，其中牙周膜成纖維細胞是牙周膜中最主要的細胞，研究證明其具有成骨細胞的許多特點，能表達多種細胞因子影響骨代謝活動。同成骨細胞一樣，人牙周膜成纖維細胞可以通
2、過表達破骨細胞分化因子(receptoractivatornuclearfactorkappaBligand，RANKL)和骨保護因子(osteoprotegerin，OPG)來調(diào)節(jié)破骨細胞的活動。RANKL和OPG均由成骨細胞／成骨樣細胞合成和分泌，RANKL是腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF)配體超家族成員，是一種跨膜蛋白，能與破骨細胞前體表面唯一的受體核因子．kB活化因子(receptoractivatorofnuclearfactor-kappaB，RANK)結(jié)合，通過一系列酶促級聯(lián)
3、反應引起破骨細胞前體分化、增殖和成熟并激活破骨細胞使其從骨膜中釋放、轉(zhuǎn)移、粘附到骨質(zhì)表面引起骨吸收，而OPG為TNF受體超家族成員，屬于一種可溶性糖蛋白，是RANKL的天然誘餌受體，能競爭性地與RANKL結(jié)合，阻斷RANK與RANKL的結(jié)合，從而抑制破骨細胞的生成、分化及其功能，抑制破骨細胞的骨吸收作用。RANKL／OPG的比值是骨代謝平衡的重要杠桿，骨微環(huán)境中RANKL與OPG表達量的相對比值決定著骨代謝的方向。牙周膜細胞通過RANKL．RANK．OPG調(diào)節(jié)軸調(diào)節(jié)牙周膜細胞參與骨吸收活動，其代謝和功能并不是受單一因素
4、的調(diào)節(jié)和影響。rhIL．1a及1，25．(OH)2D3都是骨代謝調(diào)節(jié)的重要因子，在牙槽骨改建過程中發(fā)揮重要作用。國內(nèi)外研究表明rhlL．1a和1，25．(OH)2D3調(diào)節(jié)成骨細胞／基質(zhì)細胞表達RANKL和OPG，影響RANKL／OPG比值，間接影響骨代謝平衡。本課題旨在探討rhIL．1a及1，25．(OH)2D3對人牙周膜成纖維細胞表達RANKL和OPG的影響，進一步豐富我們對牙槽骨代謝和改建的認識。本實驗在體外培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞(humanperiodontalligamentfibroblasts，HPDLFs
5、)，鑒定細胞來源。并在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平檢測正常HPDLFsRANKL和OPG的表達，探討HPDLFs參與調(diào)節(jié)牙槽骨改建的RANKL．OPG通路。初步探討骨代謝調(diào)節(jié)因子rhlL—la及l(fā)，25一(OH)2D3對HPDLFs表達RANKL和OPG的影響。本研究將實驗分為以下兩部分：一、HPDLFs的體外培養(yǎng)與鑒定以及正常HPDLFsRANKL和OPG的表達目的(1)體外培養(yǎng)HPDLFs并鑒定細胞來源，為后續(xù)實驗做好可靠的實驗模型。(2)分別從轉(zhuǎn)錄和蛋白水平觀察正常HPDLFsRANKL和OPG的表達。(3)探討HPDLFs參
6、與牙槽骨改建的RANKL／OPG通路。方法組織貼塊法培養(yǎng)HPDLFs，免疫組化鑒定細胞來源。采用熒光定量RT-PCR法檢測『F常HPDLFsRANKL和OPG在轉(zhuǎn)錄水平的表達，同時使用免疫組化和ELISA法檢測跨膜蛋白RANKL和分泌蛋白OPG的表達。結(jié)果(1)成功培養(yǎng)HPDLFs，細胞來源可靠。(2)無論是轉(zhuǎn)錄還是蛋白水平HPDLFs都分泌和表達RANKL和OPG，并且OPG的表達強于RANKL的表達，以維持牙周膜內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。(3)HPDLFs通過RANKL-OPG通路參與調(diào)節(jié)牙槽骨改建。結(jié)論HPDLFs同成骨細胞
7、～樣，通過RANKL．OPG通路調(diào)節(jié)牙槽骨改建。在『F常生理情況下，OPG的表達強于RANKL的表達，以維持牙周膜內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。二、rhIL．1a、1，25．(OH)2D3對人牙周膜成纖維細胞表達RANKL和OPG的影響目的(1)探討骨代謝調(diào)節(jié)因子rhIL—la對HPDLFs表達RANKL和OPG的影響。(2)初步探討rhlL．1a與1，25一(OH)2D3聯(lián)合作用對HPDLFs表達RANKL和OPG的影響，豐富我們對牙槽骨改建的認識。方法(1)用不同濃度rhlL—la(0、5、10、20ng／m1)作用于體外培養(yǎng)的H
8、PDLFs，于24h后收集細胞，利用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測RANKLmRNA和OPGmRNA的表達。(2)10ng／mlrhlL-1僅與1×10一mol／L1，25．(OH)2D3聯(lián)合作用于體外培養(yǎng)的HPDLFs，于48h后收集細胞，利用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測RANKLmRNA和OPGmRNA的表達，探討RANKL／O
