黃芩苷對(duì)人牙周膜細(xì)胞ranklopg表達(dá)的影響

黃芩苷對(duì)人牙周膜細(xì)胞ranklopg表達(dá)的影響

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1、黃芩苷對(duì)人牙周膜細(xì)胞RANKLOPG表達(dá)的影響【摘要】目的研究黃芩苷對(duì)人牙周膜細(xì)胞核因子κB受體激活物配基和骨保護(hù)素(RANKLOPG)表達(dá)的影響及其作用機(jī)制。方法首先構(gòu)建轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βⅡ型受體(TGFβⅡR)靶向siRNA真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染正常人外周血T細(xì)胞,使T細(xì)胞表面的TGFβⅡR基因沉默,繼而將轉(zhuǎn)染與未轉(zhuǎn)染靶向性TGFβⅡR基因沉默的T細(xì)胞和正常人牙周膜成纖維細(xì)胞置于加有黃芩苷和內(nèi)毒素的培養(yǎng)基中,分為6組:①正常牙周膜成纖維細(xì)胞+內(nèi)毒素+轉(zhuǎn)染siRNA1的T細(xì)胞+黃芩苷;②正常牙周膜成纖維細(xì)胞+內(nèi)毒素+轉(zhuǎn)

2、染siRNA1的T細(xì)胞;③正常牙周膜成纖維細(xì)胞+內(nèi)毒素+正常T細(xì)胞+黃芩苷;④正常牙周膜成纖維細(xì)胞+內(nèi)毒素+正常T細(xì)胞;⑤正常牙周膜成纖維細(xì)胞+黃芩苷;⑥正常牙周膜成纖維細(xì)胞。共培養(yǎng)48h,RTPCR檢測(cè)牙周膜細(xì)胞RANKL和OPG的表達(dá),計(jì)算RANKL/OPG比值。結(jié)果①酶切鑒定正確的克隆測(cè)序結(jié)果與設(shè)計(jì)的目的序列完全一致;②轉(zhuǎn)染siRNA1的T細(xì)胞組的TGFβⅡRmRNA的表達(dá)被明顯抑制;③RANKL/OPG的比值在各組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論成功構(gòu)建了TGFβⅡR靶向siRNA真核表達(dá)載體并

3、成功轉(zhuǎn)染T細(xì)胞;黃芩苷可以降低牙周膜細(xì)胞表面RANKL/OPG比值;TGFβ的信號(hào)傳導(dǎo)在黃芩苷影響牙周膜成纖維細(xì)胞表面的RANKL/OPG表達(dá)過(guò)程中起著重要作用;黃芩苷并非只通過(guò)TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)通路,而是亦通過(guò)其他通路對(duì)牙周膜成纖維細(xì)胞表面的RANKL/OPG進(jìn)行調(diào)控?!娟P(guān)鍵詞】轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βⅡ型受體;小干擾RNA;核因子κB受體激活物配基;骨保護(hù)素;牙周膜成纖維細(xì)胞  ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectofbaicalinontheexpressionofreceptoractiva

4、torofnuclearfactorκBligand(RANKL)andosteoprotegerin(OPG)inculturedhumanperiodontalligamentcells(HPDLcells)asechanism.MethodsallinterferringRNA(siRNA)eukaryoticexpressionvectortargetedtransforminggroediumthathadbeenaddederasechainreaction(RTPCR)portantroleintheeff

5、ectofbaicalinonRANKL/OPGratioonPDLcells;④BaicalinactsnotonlythroughTGFβtoregulateRANKL/OPGinPDLcells,butalsothroughotherpathinggroallinterferingRNA(siRNA);receptoractivatorofnuclearfactorκBligand(RANKL);osteoprotegerin(OPG);periodontalligamentcells(PDLC) 骨保護(hù)素(oste

6、oprotegerin,OPG)及其配體核因子κB受體激活物配基(receptoractivatorofnuclearfactorκBligand,RANKL)是調(diào)控破骨細(xì)胞生成和活化的關(guān)鍵因子,在調(diào)節(jié)骨質(zhì)吸收中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)OPGRANKL能在人牙周膜成纖維細(xì)胞(periodontalligamentcell,PDLC)表達(dá),并受多種因素調(diào)節(jié)[13]。在口腔局部微環(huán)境中,眾多因素通過(guò)作用于牙周組織,使OPG與RANKL的濃度增加或減少來(lái)調(diào)控局部骨組織代謝?! 〖?xì)菌激發(fā)的訴諸免疫炎癥反應(yīng)是造成和影響牙周組織

7、破壞的主要原因。黃芩苷的抗炎作用則決定了其在牙周病的防治中可能起到重要作用。有研究證實(shí),黃芩苷、淫羊霍苷和大黃素組合時(shí)可抑制內(nèi)毒素(LPS)刺激下人牙齦成纖維細(xì)胞中前列腺素E2(PGE2)的產(chǎn)生,亦可抑制實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙槽骨吸收[4]。本研究的第一個(gè)目的,即擬通過(guò)觀察黃芩苷對(duì)PDLC上OPGRANKL表達(dá)的影響,從而證實(shí)黃芩苷對(duì)牙槽骨的吸收的調(diào)節(jié)作用?! ⊙乐苎讜r(shí),T細(xì)胞的數(shù)量、活性增高,導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子分泌增加,加重牙周炎癥和骨吸收。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforminggroinggroallinterferingRN

8、A,siRNA)真核表達(dá)載體,并將其轉(zhuǎn)染T細(xì)胞,隨后將正常PDLC與轉(zhuǎn)染或未轉(zhuǎn)染siRNA的T細(xì)胞置于加有內(nèi)毒素和黃芩苷的培養(yǎng)液中,觀察黃芩苷對(duì)正常PDLC上OPGRANKL表達(dá)的影響?! ?材料與方法  1.1TGFβⅡR靶向siRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)GenBank中報(bào)道的TG

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