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《黃芩苷對(duì)人外周血t細(xì)胞tcr vβ mrna表達(dá)的影響的論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、黃芩苷對(duì)人外周血T細(xì)胞TCRVβmRNA表達(dá)的影響的論文作者：龔淑琪，傅穎媛，孫午，姜青龍，舒奇【摘要】目的研究黃芩苷對(duì)人外周血t細(xì)胞表面tcrvβmrna表達(dá)的影響及其可能受體。方法采用尼龍毛柱法分離t淋巴細(xì)胞，將其分為空白對(duì)照組（t1）、黃芩苷組（t2）、抗體封閉用藥組（t3）、抗體封閉對(duì)照組（t4），37℃培養(yǎng)48h，trizol法提取總rna，實(shí)時(shí)熒光rt-pcr法檢測(cè)各組tcrvβmrna表達(dá)。結(jié)果t2組較t1組tcrvβmrna的表達(dá)明顯增強(qiáng)（p﹤0.01）；t3組較t2組tcrvβmrna的表達(dá)明顯減低（p
2、﹤0.01）；t3組較t4組tcrvβmrna的表達(dá)增高（p>0.05）。結(jié)論黃芩苷能顯著增加t細(xì)胞表面tcrvβmrna的表達(dá)；t細(xì)胞受體（tcrαβ）是黃芩苷作用于t細(xì)胞的主要受體之一。【關(guān)鍵詞】黃芩苷；t細(xì)胞受體；tcrvβmrna；實(shí)時(shí)熒光rt-pcrabstract：objectivetostudytheeffectofbaicalinonthemrnaexpressionoftcrvβonthesurfaceofhumanperipheralbloodtcellsandexplorethepossibl
3、ereceptorforbaicalin.methodstcellsnmethod,anddiuidedintofourgroups:blankcontrolgroup(t1),baicalingroup(t2),antibodyblocking4druggroup(t3)andblockingcontrolgroup(t4).afterincubationfor48h,thetcrvβmrnaexpressionindifferentgroupsefluorescentrt-pcr.results1.thetcrvβe
4、xpressionoft2groupprovethetcrvβexpressionsignificantlyandthetcrαβisoneofthemajorreceptorsforbaicalin keyrna;real-timefluorescentrt-pcr 黃芩是一種唇形科多年生草本植物的干燥根，作為藥用已有上千年的歷史，其味苦、性寒，具有清熱解毒、涼血止血、除熱安胎的功效。.其主要活性成分黃芩苷（分子式c21h18o11、分子量446.35）是一種黃酮類化合物，研究發(fā)現(xiàn)黃芩苷具有抗病毒［1］，抗炎癥［2
5、］，抗腫瘤［3］及免疫調(diào)節(jié)的作用［4］。其中對(duì)黃芩苷免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究，尤其是抗病毒、抗腫瘤方面的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制已成為學(xué)者們關(guān)注的熱點(diǎn)問題之一，但目前的研究大多局限于細(xì)胞水平。本實(shí)驗(yàn)在本室既往摸索的黃芩苷最佳體外作用濃度及促進(jìn)t、b細(xì)胞體外增殖研究的基礎(chǔ)上，從黃芩苷對(duì)tcrvβmrna表達(dá)的影響入手，結(jié)合抗體封閉技術(shù)，試圖從分子水平上探索黃芩苷作用t細(xì)胞表面的可能受體?！ ?材料與儀器 1.1細(xì)胞及藥品人外周血濃縮白細(xì)胞購(gòu)自江西省血液中心，黃芩苷由江西省中醫(yī)藥研究所提供（純度＞98%）?！ ?.2試劑及儀器鼠抗人tcr（
6、αβ）單克隆抗體（美國(guó)bd公司），revertaidtmfirststrandcdnasynthesiskit（mbi公司），trizol試劑、sybrgreenqpcr試劑盒（北京全式金生物技術(shù)有限公司），myiq實(shí)時(shí)熒光定量pcr儀（美國(guó)bio-rad公司）?！ ?.3qpcr引物由primierprimer5.0軟件設(shè)計(jì)，上海生工生物工程有限公司合成。以β-actin（β-肌動(dòng)蛋白）為內(nèi)參基因，序列如下：tcrvβ(xm_001716513)141bpfor_001101)128bpforc，再利用玻璃貼壁法去除單
7、核細(xì)胞，最后將收集的淋巴細(xì)胞用尼龍毛柱法分離t細(xì)胞。洗滌收集的t細(xì)胞，用0.2%臺(tái)朌藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞活率（≥95%），補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)（cdc）鑒定t細(xì)胞純度（≥90%），最后調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/ml?！ ?.2實(shí)驗(yàn)分組按表1分組加樣后轉(zhuǎn)種于24孔板上，置37℃5%co2箱培養(yǎng)48h。表1t細(xì)胞分組加樣表（略） 2.3總rna提取及鑒定①利用trizol試劑提取總rna。②100v、1%瓊脂糖凝膠電泳觀察總rna完整性。③紫外分光光度計(jì)測(cè)定od260/od280，在1.80～2.0之間，說明純度較好，并計(jì)算總rn
8、a的濃度?！ ?.4實(shí)時(shí)熒光定量rt-pcr以5μg總rna為模板按試劑說明書逆轉(zhuǎn)錄為第一鏈cdna，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為20μl。qpcr反應(yīng)體系為50μl：cdna1μl、上游引物1μl、下游引物1μl、supermix25μl、sybrgreendye1μl、mg2+2μl補(bǔ)足雙蒸水至50μl。每個(gè)樣本做3個(gè)復(fù)孔，
