黃芩苷對(duì)人外周血T細(xì)胞TCRVβmRNA表達(dá)的影響

黃芩苷對(duì)人外周血T細(xì)胞TCRVβmRNA表達(dá)的影響

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1、黃芩苷對(duì)人外周血T細(xì)胞TCRVβmRNA表達(dá)的影響作者:龔淑琪,傅穎媛,孫午,姜青龍,舒奇【摘要】目的研究黃芩苷對(duì)人外周血T細(xì)胞表面TCRVβmRNA表達(dá)的影響及其可能受體。方法采用尼龍毛柱法分離T淋巴細(xì)胞,將其分為空白對(duì)照組(T1)、黃芩苷組(T2)、抗體封閉用藥組(T3)、抗體封閉對(duì)照組(T4),37℃培養(yǎng)48h,Trizol法提取總RNA,實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法檢測(cè)各組TCRVβmRNA表達(dá)。結(jié)果T2組較T1組TCRVβmRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P﹤0.01);T3組較T2組TCRVβmRNA的表達(dá)明顯

2、減低(P﹤0.01);T3組較T4組TCRVβmRNA的表達(dá)增高(P>0.05)。結(jié)論黃芩苷能顯著增加T細(xì)胞表面TCRVβmRNA的表達(dá);T細(xì)胞受體(TCRαβ)是黃芩苷作用于T細(xì)胞的主要受體之一。【關(guān)鍵詞】黃芩苷;T細(xì)胞受體;TCRVβmRNA;實(shí)時(shí)熒光RT-PCRAbstract:ObjectiveTostudytheeffectofbaicalinonthemRNAexpressionofTCRvβonthesurfaceofhumanperipheralbloodTcellsandexplor

3、ethepossiblereceptorforbaicalin.MethodsTcellswereseparatedbynylonfibercolumnmethod,anddiuidedintofourgroups:blankcontrolgroup(T1),11baicalingroup(T2),antibodyblocking4druggroup(T3)andblockingcontrolgroup(T4).Afterincubationfor48h,theTCRvβmRNAexpressionindi

4、fferentgroupswasdetectedbyreal-timefluorescentRT-PCR.Results1.TheTCRvβexpressionofT2groupwassignificanthigherthanthatofT1group(P﹤0.01).2.TheTCRvβexpressionofT3groupwasobviouslydecreasedcomparedwithT2group(P﹤0.01).3.TheTCRvβexpressionofT3groupwashigherthant

5、hatofT4group(P>0.05).ConclusionBaicalincanimprovetheTCRvβexpressionsignificantlyandtheTCRαβisoneofthemajorreceptorsforbaicalin  Keywords:Baicalin;TCR;TCRvβmRNA;Real-timefluorescentRT-PCR11  黃芩是一種唇形科多年生草本植物的干燥根,作為藥用已有上千年的歷史,其味苦、性寒,具有清熱解毒、涼血止血、除熱安胎的功效。其主要

6、活性成分黃芩苷(分子式C21H18O11、分子量446.35)是一種黃酮類化合物,研究發(fā)現(xiàn)黃芩苷具有抗病毒[1],抗炎癥[2],抗腫瘤[3]及免疫調(diào)節(jié)的作用[4]。其中對(duì)黃芩苷免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究,尤其是抗病毒、抗腫瘤方面的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制已成為學(xué)者們關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題之一,但目前的研究大多局限于細(xì)胞水平。本實(shí)驗(yàn)在本室既往摸索的黃芩苷最佳體外作用濃度及促進(jìn)T、B細(xì)胞體外增殖研究的基礎(chǔ)上,從黃芩苷對(duì)TCRvβmRNA表達(dá)的影響入手,結(jié)合抗體封閉技術(shù),試圖從分子水平上探索黃芩苷作用T細(xì)胞表面的可能受體?! ?材料與儀器 

7、 1.1細(xì)胞及藥品人外周血濃縮白細(xì)胞購(gòu)自江西省血液中心,黃芩苷由江西省中醫(yī)藥研究所提供(純度>98%)。  1.2試劑及儀器鼠抗人TCR(αβ)單克隆抗體(美國(guó)BD公司),RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(MBI公司),Trizol試劑、SYBRGreenqPCR試劑盒(北京全式金生物技術(shù)有限公司),MyiQ實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)Bio-rad公司)?! ?.3qPCR引物由PrimierPrimer5.0軟件設(shè)計(jì),上海生工生物工程有限公司合成。以β-acti

8、n(β-肌動(dòng)蛋白)為內(nèi)參基因,序列如下:TCRvβ(XM_001716513)141bpForward5’-GGGGCTGAGGCTGATT-3’Reverse5’-ACAGATGTTTGGGAGGGA-3’β-actin(NM_001101)128bpForward5’-TGTGACGTGGACATCCG-3’Reverse5’-ATCTTCATTGTGCTGGGTG-3’11  2方法  2.1T細(xì)胞分離參見(jiàn)

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