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《杜氏鹽藻甘油合成代謝調(diào)控的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要本文系統(tǒng)進(jìn)行了氮源、碳源、磷源、鹽濃度對杜氏鹽藻甘油代謝調(diào)控的影響；葡萄糖、NaCI對鹽藻中3一磷酸甘油脫氫酶活性的影響；3一磷酸甘油脫氫酶提取和純化以及動植物抽提液對鹽藻固體平板生長影響的研究。利用本實(shí)驗(yàn)室分離純化得到的無菌藻株A1研究影響杜氏鹽藻合成甘油的各種因子，如氮源、碳源、磷源、鹽濃度等。氮源中尿素對鹽藻單個(gè)細(xì)胞甘油積累量的影響最大，當(dāng)鹽藻培養(yǎng)至6d時(shí)，添加尿素培養(yǎng)液中甘油積累量為25．81pg／cell，較添加KN03培養(yǎng)液中甘油積累量高出52．45％。鹽藻單個(gè)細(xì)胞甘油含量隨著磷酸二氫鉀濃度的增加而上升，0．659／L的磷酸鹽對提高鹽藻
2、單個(gè)細(xì)胞甘油含量的作用最明顯，達(dá)到17．99pg／cell，比濃度為0．01g／L時(shí)的甘油累積量高出39．24％。碳源中葡萄糖對鹽藻細(xì)胞內(nèi)甘油含量積累的促進(jìn)作用最明顯，159／L的葡萄糖效果最佳；當(dāng)葡萄糖和NaCl以不同的濃度組合添加時(shí)，0．5mol／LNaCl，和159／L葡萄糖的組合對鹽藻的甘油積累的促進(jìn)作用最為明顯，鹽藻培養(yǎng)至第6d時(shí)，單個(gè)細(xì)胞甘油含量達(dá)到最大值25．28pg／cell，較對照提高了124．32oA。葡萄糖對鹽藻細(xì)胞內(nèi)甘油積累有顯著促進(jìn)作用，在0～159／L范圍內(nèi)葡萄糖的濃度與胞內(nèi)甘油積累顯著相關(guān)(y=1．2349x+21．429
3、，R2=O．9965)，葡萄糖濃度達(dá)至fjl59／L時(shí)，胞內(nèi)甘油積累量達(dá)到最高值40．131sg／mL，是對照的2．06倍。葡萄糖對鹽藻細(xì)胞內(nèi)總蛋白、3．磷酸甘油脫氫酶(GPDH)酶活和比活都有顯著影響，這些值在10～159／L之間產(chǎn)生較大的變化，但變化幅度與葡萄糖的濃度變化不成比例，在159／L葡萄糖時(shí)這3個(gè)值達(dá)到最大值，分別是對照的4．384、1．354、3．229倍。數(shù)據(jù)顯示葡萄糖濃度在159／L時(shí)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量增加不多，但GPDH酶活和比活卻大幅度增加。當(dāng)NaCl濃度在0．1~2．0mol／L時(shí)，單個(gè)細(xì)胞內(nèi)的甘油積累量、GPDH酶活及比活均隨
4、NaCl濃度的增加而增加，但繼續(xù)提高NaCl濃度，各值卻反而降低，當(dāng)NaCl濃度為2．0mol／L時(shí)以上各值均達(dá)到最大，甘油積累量、GPDH酶活及比活分別為3．30pg／cell，O．24；_tU／cell及9．02，分別是對照的1．38、3．00及4．93倍。與此同時(shí)，平均每個(gè)細(xì)胞蛋白質(zhì)含量卻隨著NaCl的增加而降低，當(dāng)NaCl濃度為2．5mol／L時(shí)，蛋白質(zhì)含量為21．59pg／eell，僅為對照的51％。離心收集培養(yǎng)12d的藻細(xì)胞，冰浴超聲破碎，獲得粗提液；經(jīng)2次PEG分級，采用DEAESepharoseFastFlow柱純化蛋白；經(jīng)O～O．5m
5、ol／LNaCI梯度洗脫后，在2個(gè)不同NaCl濃度的藻液樣品中分別洗脫出2個(gè)峰具有GPDH活性，2．0mol／LNaCl濃度樣品的GPDH經(jīng)DEAE純化后，2個(gè)峰所對應(yīng)的各項(xiàng)值較O．5mol／LNaCl濃度樣品的值均有大幅度提高，2．0mol／LNaCl濃度樣品的第1峰的總蛋白、總酶活及比酶活分別是0．5mol／LNaCl濃度樣品的4．23、4．50和1．06倍，而第2峰對應(yīng)的總蛋白、Ⅱ總酶活及比酶活分別是O．5mol／LNaCl濃度樣品的13．80、69．90和5．07倍，與第1峰相比各項(xiàng)值大幅度增加。數(shù)據(jù)顯示第2峰中可能存在顯著受到高濃度NaCl誘
6、導(dǎo)的“滲透調(diào)節(jié)”型GPDH同功酶。培養(yǎng)至30d時(shí)，在添加魚湯提取物的平板上，形成了較好的單藻落，藻落較大，顏色呈深綠色，而對照平板上的藻落小，呈淺綠色。通過計(jì)算植板率，發(fā)現(xiàn)隨著魚湯提取物濃度的增加，植板率越高，8％魚湯提取物濃度的平板植板率是對照平板的6．4倍。關(guān)鍵詞：杜氏鹽藻，甘油，3．磷酸甘油脫氫酶，葡萄糖，NaCI111AbstractThispapersystematicallystudiedtheinfluenceofnitrogensource，carbonSOurce，phosphatesource，andtheNaClconcentra
7、tiontotheregulationofglycerolmetabolicofDunaliellasalina，theinfluenceofglucose。NaCltotheactivityofGlycerol一3-phosphateDehydrogenase(GPD聊inD．salina，extractedandisolatedGPDH，andtestedtheinfluenceoffishextractfluidto也egrowtholD．salinaonplates．Theinfluencesofdifferentfactors，likenit
8、rogensource,carbonsource，phosphatesourceandNaCl
