自體骨髓干細(xì)胞移植治療兔糖尿病下肢缺血性疾病的實(shí)驗(yàn)的研究

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1、英文縮寫河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。研究生簽名：葫如司導(dǎo)師簽名姆防乞?qū)Ш灻绘莞ぴ荒?；’月櫥日研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成

2、果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：評(píng)蒜童同導(dǎo)師簽名：◇移年多月莎孝’日中文摘要自體骨髓干細(xì)胞移植治療兔糖尿病下肢缺血性疾病的實(shí)驗(yàn)研究摘要研究背景：隨著人類生活水平的提高和老齡社會(huì)的到來，糖尿病的發(fā)病率逐年增高，其并發(fā)癥糖尿病足和截肢所帶來的醫(yī)療耗費(fèi)巨大，給社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。傳統(tǒng)治療主要是內(nèi)科的藥物治療、外科的手術(shù)治療及介入治療進(jìn)行血流重建，療效均不夠理想。干細(xì)胞移植這項(xiàng)新技術(shù)在

3、此領(lǐng)域的臨床應(yīng)用得到越來越多的關(guān)注，給糖尿病足的治愈提供了新方法。第一部分糖尿病動(dòng)物模型的制作目的：本實(shí)驗(yàn)選用四氧嘧啶(ALx)誘導(dǎo)糖尿病動(dòng)物模型，探索一種安全、穩(wěn)定、動(dòng)物低死亡率的糖尿病模型建立方法。方法：健康新西蘭兔20只，隨機(jī)分為A、B兩組，每組lO只。兩組給藥前均禁食12小時(shí)，A組為一次給藥法組，即按150mg／kg經(jīng)耳緣靜脈快速注射新鮮配置的5％ALX；B組為兩次給藥法組，第1次給藥，按80mg／kg經(jīng)耳緣靜脈快速注射新鮮配置的5％ALX，24小時(shí)后第2次給藥，按120mg／埏再次經(jīng)耳緣

4、靜脈快速注射新鮮配置的5％ALX。14天后測(cè)中文摘要空腹血糖值，以空腹血糖>16mmol／L作為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果：A組48小時(shí)內(nèi)死亡4只，第3天死亡2只，第5天死亡1只，死亡率70％，1只血糖短暫升高，兩周后恢復(fù)正常，2只達(dá)到糖尿病模型標(biāo)準(zhǔn)，成模率20％；B組48小時(shí)內(nèi)死亡1只，死亡率1O％，1只血糖短暫升高，兩周后恢復(fù)正常，8只達(dá)到糖尿病模型標(biāo)準(zhǔn)，成模率80％。結(jié)論：1．ALX連續(xù)2次小劑量給藥法優(yōu)于1次性高劑量給藥，降低了死亡率，提高了成模率。2．應(yīng)用ALX制備糖尿病模型，是一種經(jīng)濟(jì)、安全

5、、可靠的方法。關(guān)鍵詞：四氧嘧啶；糖尿??；動(dòng)物模型；兔第二部分糖尿病兔骨髓干細(xì)胞動(dòng)員及影響目的：通過監(jiān)測(cè)健康兔、糖尿病兔及未成模兔三組應(yīng)用相同劑量粒細(xì)胞集落刺激因子(G．CSF)動(dòng)員后的外周血單個(gè)核細(xì)胞數(shù)、骨髓單個(gè)核細(xì)胞數(shù)及骨髓粒。單核細(xì)胞集落形成單位(CFU．GM)培養(yǎng)計(jì)數(shù)，對(duì)比三組的動(dòng)員效果有無差別，以探討糖尿病對(duì)骨髓干細(xì)胞動(dòng)員有無影響。通過比較糖尿病動(dòng)物模型在動(dòng)員前后血紅蛋白、血小板、空腹血糖、血液流變學(xué)等各項(xiàng)指標(biāo)的變化情況，探討骨髓干細(xì)胞動(dòng)員對(duì)糖尿病的影響。中文摘要方法：健康新西蘭兔，隨機(jī)分

6、為A、B、C三組。A組為健康兔10只，B組為糖尿病兔1O只，C組為未成模兔5只(ALX劑量同B組)。A、B、C三組在動(dòng)員前分別測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞數(shù)，然后三組分別皮下注射lOug／kgG．CSF進(jìn)行動(dòng)員，每天1次，連續(xù)5天。在應(yīng)用G．CSF動(dòng)員期間，每天檢測(cè)三組外周血單個(gè)核細(xì)胞數(shù)，觀察各組動(dòng)員效果，動(dòng)員第6天檢測(cè)三組外周血單個(gè)核細(xì)胞數(shù)，同時(shí)三組均抽取骨髓液3ml，分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞，檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞數(shù)，并進(jìn)行CFU-GM培養(yǎng)。B組(糖尿病組)中的10只糖尿病兔在動(dòng)員前及動(dòng)員第6天分別監(jiān)測(cè)血紅蛋白、

7、血小板、空腹血糖、血液流變學(xué)變化情況。結(jié)果：1．動(dòng)員前三組外周血單個(gè)核細(xì)胞數(shù)無差別。動(dòng)員后三組外周血單個(gè)核細(xì)胞均較前明顯升高，計(jì)數(shù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。動(dòng)員后三組骨髓單個(gè)核細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)比較無差別。2．CFU．GM培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，三組均在培養(yǎng)的5～6天開始有集落形成，以后數(shù)目逐漸增多，大約12天達(dá)高峰，此后集落不斷增大，總的集落數(shù)不再增加，三組集落培養(yǎng)計(jì)數(shù)無差別。3．動(dòng)員前后10只糖尿病兔的晨空腹血糖值有一定的下降趨勢(shì)，血紅蛋白、血小板均有所升高，但變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。10只糖尿病兔的晨空腹血流變中的血漿粘度及

8、紅細(xì)胞聚集性動(dòng)員前后無明顯變化；全血粘度動(dòng)員后較動(dòng)員前均明顯升高。結(jié)論：1．糖尿病對(duì)骨髓干細(xì)胞動(dòng)員效果無影響。2．應(yīng)用G．CSF骨髓干細(xì)胞動(dòng)員對(duì)糖尿病兔的血糖、血紅中文摘要蛋白、血小板無影響，對(duì)血流變有影響，提示臨床應(yīng)予重視并干預(yù)。關(guān)鍵詞：粒細(xì)胞集落刺激因子：骨髓干細(xì)胞動(dòng)員；粒．單核細(xì)胞集落形成單位；糖尿病動(dòng)物模型；血流變第三部分自體骨髓干細(xì)胞移植治療兔糖尿病下肢缺血性疾病目的：對(duì)比骨髓干細(xì)胞移植、皮下注射G-CSF、骨髓干細(xì)胞移植聯(lián)合G．CSF皮下注射三種方法對(duì)缺血組織血管新生的