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《小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞建系和鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、上海第二醫(yī)科大學(xué)2001級(jí)碩士研究生論文小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞建系和鑒定中文摘要胚胎干細(xì)胞是一種從哺乳動(dòng)物囊胚中獲得的全能細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞能在體外特定條件下無(wú)疆地自我更薪并能分化成體皮任四一種纓胞，因此它在基礎(chǔ)研究領(lǐng)域和臨床治療領(lǐng)域都有重要的研究?jī)r(jià)值。首先。胚胎干細(xì)胞可用于研究早期發(fā)育過(guò)程中發(fā)生的細(xì)胞和分子事件。其次，胚胎干細(xì)胞可用于藥物篩選和毒物篩查。最后，也是最吸引人的是胚胎干細(xì)胞將來(lái)可能用于細(xì)胞治療取代受損組織，經(jīng)過(guò)基因工程改造的胚胎干細(xì)胞在整個(gè)生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域也將產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。胚胎干細(xì)胞有三種來(lái)源：一是從正常受精卵
2、形成的囊胚中獲得；二是從通過(guò)核轉(zhuǎn)移途徑得到的囊胚中獲得；三是從孤雌發(fā)育形成的囊胚中獲得。第三種途徑產(chǎn)生的胚胎干細(xì)胞稱(chēng)為孤雌胚胎干細(xì)胞。孤雌胚胎干細(xì)胞作為一種特殊的胚胎干細(xì)胞也有重要的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用價(jià)值。首先，由受精卯發(fā)育成囊胚后建立的普通胚胎干細(xì)胞系由于主要組織相容復(fù)合物(MHC)在不同個(gè)體之間存在顯著差異將可能導(dǎo)致移植后免疫排斥。而孤雌胚胎干細(xì)胞的MHC等位基因是純合子(也可能存在少量的同源染色體交換)，因此從理論上將大大降低免疫排斥的可能性。其次，已有文獻(xiàn)報(bào)道哺乳動(dòng)物孤雌胚胎干細(xì)胞具有向三個(gè)胚層細(xì)胞分化的能力，因此孤雌
3、胚胎千緬胞將來(lái)也可以作為緬胞治療的一個(gè)來(lái)源。最后，印跡基霞在胚胎于細(xì)胞中的表達(dá)情況很復(fù)雜，孤雌胚胎干細(xì)胞可作為一個(gè)有力的研究工具對(duì)印跡基因的表達(dá)和功能做進(jìn)一步研究。研究目的：建立小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞系并對(duì)其進(jìn)行全面鑒定。材料與方法：首先用化學(xué)試劑激活小鼠次級(jí)卵母細(xì)胞進(jìn)行孤雌發(fā)育，將體外培養(yǎng)獲得的囊胚接種到飼養(yǎng)層細(xì)胞上進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，獲得足夠多的細(xì)胞后進(jìn)行凍存和鑒定。胚胎干細(xì)胞的鑒定主要有兩個(gè)指標(biāo)：一是是否能在體外長(zhǎng)期增殖且保持不分化狀態(tài)；二是是否具有全能性，即能否在體內(nèi)和體外分化成來(lái)源于三個(gè)胚層的細(xì)胞。第一個(gè)指標(biāo)的蕤定可通
4、過(guò)將孤雌胚胎干細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)體外傳代培養(yǎng)并觀察其生長(zhǎng)狀態(tài)，同時(shí)對(duì)早期和傳代較晚的孤雌胚胎干細(xì)胞進(jìn)行未分化分子標(biāo)志鑒定。第二個(gè)指標(biāo)可以通過(guò)鑒定孤雌胚胎干細(xì)胞是否能在體內(nèi)形成畸胎瘤以及能否在體外自發(fā)或誘導(dǎo)分化成三個(gè)胚層的細(xì)胞來(lái)完成。上海第二醫(yī)科大學(xué)2001級(jí)碩士研究生論文結(jié)果：建立了三個(gè)小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞系。三個(gè)系均在體外連續(xù)傳代50次以上且保持未分化狀態(tài)。小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞具有與普通小鼠胚胎干細(xì)胞相同的形態(tài)學(xué)特征：都呈鳥(niǎo)巢狀生長(zhǎng)，細(xì)胞核漿比大，有明顯的核仁，細(xì)胞之間的界限不清。經(jīng)過(guò)鑒定證實(shí)小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞來(lái)源于次級(jí)卵母細(xì)胞，
5、能在體內(nèi)和體外分化為三個(gè)胚層來(lái)源的細(xì)胞。小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞的核型是40，XX。結(jié)論：我們建立的三個(gè)小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞系具有在體外長(zhǎng)期增殖且保持不分化的能力，具有多能性。關(guān)鍵詞：孤雌生殖胚胎干細(xì)胞圭塑蘭三墨
