小鼠ntes（核移植胚胎干細(xì)胞）系的建立和鑒定人es（胚胎干細(xì)胞）系建立的探索

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1、小鼠ntES(核移植胚胎干細(xì)胞)系的建立與鑒定人ES(胚胎十細(xì)胞)系建立的探索小鼠ntES(核移植胚胎干細(xì)胞)系的建立與鑒定人ES(胚胎干細(xì)胞)系建立的探索碩士研究生：蔣永華指導(dǎo)老師：孫筱放教授中文摘要治療性克隆(therapeuticcloning)是胚胎干細(xì)胞技術(shù)(embryonicstemcell，EScell)與核移植(nucleartransfer)技術(shù)的結(jié)合產(chǎn)生的不以生殖為目的新技術(shù)，該項(xiàng)技術(shù)使許多目前醫(yī)學(xué)上沒(méi)有有效治療方案的疾病重新獲得治愈的可能。本研究擬先通過(guò)小鼠ES細(xì)胞的培養(yǎng)及核移植顯微操作技術(shù)的練習(xí)，建立小鼠核移植后胚胎干細(xì)胞(nucleartransfer

2、embryonicstemcell．ntEScell)，再進(jìn)一步探索人的ES細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定，來(lái)源于IVF低質(zhì)量廢棄胚胎的人ES細(xì)胞系建系，為將來(lái)治療性克隆試驗(yàn)的開(kāi)展建立試驗(yàn)基礎(chǔ)。研究?jī)?nèi)容包括一下兩個(gè)部分：第一部分小鼠ntES細(xì)胞的建立及鑒定第一節(jié)不同品系小鼠ES細(xì)胞系的建立與鑒定研究目的l探索建立小鼠ES細(xì)胞建系的有效方法。2對(duì)建立的Es細(xì)胞系進(jìn)行鑒定，嵌合體小鼠的獲得。方法1建立小鼠的Es培養(yǎng)體系1．1MEF飼養(yǎng)層的制備取孕12．5～13．5d的I(M孕胎鼠，制備MEF，1011g／ml絲裂霉素C作用2—3小時(shí)后，重新接種制作飼養(yǎng)層。1_2小鼠囊胚的獲取采用兩種方式獲取囊胚

3、：(1)dpc3．5-4．5沖洗子宮獲取囊胚。(2)dpc2．5天沖洗輸卵管收集卵裂球，卵裂球體外培養(yǎng)獲取囊胚。1．3ICM原代培養(yǎng)!：墾!生!!堡堡焦墅墮王塑墮!墨墮壟塞皇鱉塞△墜!墅墮王塑墮!墨堡蘭塑塑室——TheestablishmantandcharacterizatiOnofthemousentESceUlines，ToinvestigatetheestablishmantofhEScelllines．M．Dcalldidate：YonghuaJiall呂Supervisor：Pr0￡)(iao‰gSlHlTheSecondpeOple’shospi協(xié)lofGu鯽gz

4、hou，G哪gzlloumedicalco¨ageAbstractThereantwopartsinourstudy：PartITheest疊bHshm—ntaⅡdcharacteI·izationofthemousentESsectionsIIsoIationandcunivationembryonicstemCeULinesDeriVedfhmVhriousMOusestrain‰【objectiVeI1．Toincre豁emeemciencyofmousee玎心ryonicstemceU(ES)linesdcriVedf如mvariousmousestra協(xié)s．2．Det

5、e徹inetllech甜acterizationsofmEScelllines．【method】1Prep啦tionoffeederlayers．MitoticallyiImctivatedMEFwereusedasfeeder·2Mouswere瑚1domlydividedintocontrolgr01lportestgr01lp，controlgroupblastocystobtained丘Dm3．5dayspost-cotium(dpc)superoⅦlatcdmouse，andtranslatcimoESmedi啪cultureonfeeder．Testgrouphar

6、vestingembryosatt11eedymonllastage肺m2．5dpcmouse，mat嘶ngtobla喲cystsbyinVnrocllltIlrc-3Mouseblastocystswereclllturcdonfeederlayerfor4·5days，theculturcdcellsfbrnledcoloIlies，thcsecloIl呈esWerepickoutontonewlypreparcdMEFfcederlayers，a11d“l(fā)tuerovernight，tlleIln卯sinized、ⅣitlltD，psin．EDTA·4Detemlinem

7、echmcterizationsofmEScelllines．【Resunsl1Harves衄gembryosattheearIymoruIas詛ge舶m2．5dpcmouse，ma州ngtobIastocystsbyin“troclllt眥e，cangatllermoreblastocyststllenf幻m3·5dpcsupemⅦlatedmouse．2ICMpickomomonewlypreparedMEFfeederlaycrs，andcultucroVcrnight，thenVn小