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《豬2型圓環(huán)病毒全基因組測序分析和感染克隆的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、SequenceAnalysisofPorcineCircovirusType2CompleteGenomeandInfectiousCloneResearchThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomySunWeibo（CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine）Supervisor:AssociateProf.QinXiaobingProf.ShanH
2、uQingdao.ChinaJune,2015萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：時(shí)間：年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制
3、手段保存、匯編學(xué)位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：時(shí)間：年月日導(dǎo)師簽名：時(shí)間：年月日萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要豬2型圓環(huán)病毒全基因組的測序分析和感染克隆研究摘要豬2型圓環(huán)病毒（Porcinecircovirus2,PCV2），是至今為止發(fā)現(xiàn)的最小的動(dòng)物病毒之一。其主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征，對(duì)規(guī)?；B(yǎng)殖場造成了不可估量的損失。由于其可引起免疫器官的病理變化，使豬自身的免疫系統(tǒng)受損，更加劇了其他病原菌的侵入，加重病情?，F(xiàn)在越來越受到養(yǎng)殖者和科研工作
4、者的關(guān)注。本試驗(yàn)從山東省收集了多份PMWS疑似病料，并根據(jù)PCV2的Cap蛋白通過Prime5設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物，用來檢測。將陽性病料再經(jīng)過磷鎢酸染色，在透射電鏡下觀察。萊西的病料中觀察到了17nm左右的PCV2病毒粒子。并將病料接種到PK-15細(xì)胞中，用D-氨基葡萄糖處理，增加病毒的感染量。連續(xù)盲傳6代，并用PCR來檢測每代收獲的病毒液。經(jīng)檢測，全為陽性。為接下來的試驗(yàn)提供了試驗(yàn)材料。根據(jù)GenBank中己發(fā)表的PCV2全基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，用PCR方法直接從接毒細(xì)胞中擴(kuò)增出PCV2的全基因組序列。將擴(kuò)增片段克隆于pMD19-T載體進(jìn)行測序，結(jié)果表
5、明PCV2基因組全長為1767bp。應(yīng)用DNAstar分析結(jié)果表明，在1479bp-1468bp處都含有特殊的TCA/AAC/CCC/CG(T)C序列，所以基因型為PCV2-1型。同時(shí)與選取的國內(nèi)外23株已公布的序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹比較，確定其基因亞型為PCV2-1B，并命名為LX株。再選取山東地區(qū)的6株序列進(jìn)行分析，核苷酸序列的同源性均超過96.9%，同源性較高，其3個(gè)ORF均出現(xiàn)了突變。ORF1和ORF3沒有引起氨基酸的變化，而ORF2有2處氨基酸發(fā)生突變，128R-W，179S-F，而128位位于PCV2獨(dú)特的抗原位點(diǎn)，推測影響PCV2的抗原性，進(jìn)而影響毒力
6、。將pMD19-T-PCV2用SacⅡ單酶切，回收PCV2全基因。同時(shí)將目的載體pBLuescriptKS載體用SacⅡ單酶切回收，并用去磷酸化酶CIAP處理，防止載體自連。將PCV2-1B與pBluescriptKS連接，獲得了兩個(gè)重組克隆載體，分別命名為pBluescriptKS-PCV2（+）和pBluescriptKS-PCV2（-）。將2個(gè)載體轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞，通過RT-PCR檢測，結(jié)果表明構(gòu)建的PCV2克隆具有感染性，但是pBluescriptKS-PCV2（+）的感染性較強(qiáng)。本研究成功克隆出PCV2的全基因，并構(gòu)建了兩個(gè)感染性克隆，為PCV2的致
7、病機(jī)理和新型疫苗的研制提供了技術(shù)和理論依據(jù)。關(guān)鍵字：PCV2；全基因序列；同源性；感染性克隆萬方數(shù)據(jù)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractSequenceAnalysisofPorcineCircovirusType2CompleteGenomeandInfectiousCloneResearchAbstractPorcinecircovirustype2(Porcinecircovirus2,PCV2),wasoneofthesmallestanimalvirusfoundsofar.PCV2wasthemaincauseofpostweaningmulti
8、systemicwast
