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《抗cd20人鼠嵌合單克隆抗體在轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺中表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、中園農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文摘要CD20是B淋巴細胞表面特異性抗原之一，在淋巴細胞分化甲期表達井H能激活淋巴細胞，導致淋巴細胞增殖分化。CD20抗原由丁其在淋巴細胞表面廣泛存在和不會從淋巴細胞襲向游離進入血液循環(huán)的特性被選為治療鋅種淋巴癌癥的靶蛋白?？笴D20的嵌臺抗體由鼠抗人CD20可變區(qū)肽段和人抗體196恒定區(qū)肽段組成，臨床實驗證明嵌合抗體的治療效果明顯14副反席小，并且已經(jīng)被美國FDA批準投入市場。目前嵌臺抗體通過CHO癌細胞生產(chǎn)，但細胞的低表達昔自l細胞培養(yǎng)的高成本限制抗體的人齡生產(chǎn)。本研究的目標
2、就是制備高效表達CD20嵌臺抗體的轉(zhuǎn)基岡動物模刑。我們構建了乳腺特異性抗體輕鏈表選載體HuKlF-pBCl和重鏈表達載體HuGlF-pBCl，表達載體線性化后等比例混合，通過顯微共注射受精卵雄原核的方法制蚤轉(zhuǎn)基因小鼠。注射衍共出生52只小鼠，用PCR和Southern雜交的方法檢測m5只(39，2d)烈鏈整合的轉(zhuǎn)基因刖性小鼠，10只單鏈整合的轉(zhuǎn)基因剛性小鼠。轉(zhuǎn)基岡粘合率28．8％，雙鏈整臺率為9．6％。將雙鏈整合的日l性小鼠和野牛型小鼠配種擴群，采集乳汁樣^^。Western雜交檢測轉(zhuǎn)基因母鼠乳汁中抗
3、CD20戰(zhàn)合抗體的表達。在F0代26，36號鼠．Fl代21，22，23號鼠中檢測刮重組抗體的表達。E1．ISA進一步定母分析抗體在小鼠乳汁中的含鼙，其中F0—36，F(xiàn)l一21號小鼠表達餐分別為O29m∥ml，0．31m∥mIF0．26表達量達7．6mg／ml，F(xiàn)1—22表達埔達143mg／ml，F(xiàn)I一23表達量高達17．7m∥ml。關鍵詞：CD20，淋巴癌癥，嵌合抗體，轉(zhuǎn)基因小鼠AbstractCD20isaspecificBlymphocytesurfaceantigenItiswideexpres
4、sedattheearlystageofBlymphocytedevelopmentandplaysanimportantroleintheiractivationandproliferation．CD20hasbeenchosenasthetargetinthetherapyofallkindsoflymphomaforthecharacteristicofnotsheddingfromthesurfaceofCD20positivecellsandnotinterlizingintocellaft
5、erbindingtoantibody．ChimericCD20antibodyiscomposedofthemouseanti-humanCD20peptideinvariableregionandhumanIgGpeptideinconstantregion．Itrevealedseveraladvantagesandlessadveme—effectinclinictrialthanotherdrugsusedforBlymphomatreatment，andhasbeenapprovedbyF
6、DAillUS．Ain1997．Thechimericantibodyisproducedfromanti—CD20CHOcells，butthelowantibodyexpressionlevelof30ugprotein／10。cellsperdayandhighcostincellculturehavebeenastumblingblockinindustrialproduction．Theobjectofourresearchistomakethetransgenicanimalmodelto
7、expresstheantibodyathighlevels．Weconstructedaantibodylightchainexpressionvector(HuKlF—pBCllandaheavychainexpressionvector(ttuG1F-pBC1)，whicharebothspecificfortheproteinexpressioninmammaryglandThevectorsweremixedtogetherattheratioof1：1afterbeinglinearize
8、dbySalIandNotldigestion．Linearvectorsweredilutedto2．5rlg／ulandco-microinjectedintothepronucleioffertilizedeggs．Inthe52miceproducedbymicroinjection，5(3femaleand2male)founderlinemicewereidentifiedbyPCRandsouthernblottingcontainingb
