青海血蜱cdna表達(dá)文庫的免疫篩選及基因克隆表達(dá)

《青海血蜱cdna表達(dá)文庫的免疫篩選及基因克隆表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、摘要青海m蜱(Haemaphysalisqinghaiensis)及其傳播的疾病嚴(yán)重威脅著我國肖牧業(yè)的發(fā)展。囂蘺，對(duì)蜱數(shù)控制方法主要是瘦熙訖學(xué)藥物滅蜂，但隨著蜱耐藥性的產(chǎn)生馭及環(huán)境污染和藥物殘留等嚴(yán)熏公共至壘閥題靜出現(xiàn)追使久們尋求防治熟新途徑。在眾多控翻孵的方法審，免疫學(xué)醛裁是前景墩誘人的方法之一。將青?？境沈鏲DNA表達(dá)文癢與宿主蕾BL21(DE3》丑ysE按一定毖捌混合照鬻并鑲嬡，警理斑出現(xiàn)盾將Nc膜覆蓋于頂廉膠表面并繼續(xù)培養(yǎng)3。5h。隨廄，將此Nc膜依次與抗青海血蛑幼蟀陽性血清翱堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗兔IgG反應(yīng)，最厝加底物攫色，初步篩選得到藍(lán)紫色的陽性克隆，并簧簿直至整

2、個(gè)貘上均為閣性信號(hào)為盤。用所得麓萑噬菌俸轉(zhuǎn)染窩變菌BM25．8使之童動(dòng)?？寺檠M質(zhì)粒，用此亞克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌JMl09并從中提取重組質(zhì)粒進(jìn)行PCR和測序。序列分輯結(jié)巢表鞠：共獲得lO個(gè)蒸困，分舅g命名為№醵一l、№強(qiáng)屹、HqLA-3、№LA一4、HqLA一5、HqLA-6、HqL矗-?、HqLA-8、HqLA-9釋瀚LA—lO，它們酶大小分掰壽798bp、421bp、637bp、392bp、297bp、1473bp、626bp、201bp、989bp和551bp。其中HqLA～1～HqLA～9為青海贏蜱所固有的新發(fā)現(xiàn)蒸因，提交至GenBank／戳8i獲取廖列號(hào)，序列號(hào)分象舞

3、FE674076、FE674077、FE674078、懲67鯔8唾、FE674079、FE674080、FE674081、FE674082和FE674083。其中HqLA一2、HqLA-6、HqLA-7、HqLA：9和HqLA-IO共5個(gè)基因成功進(jìn)行誘導(dǎo)嶷達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物的分子嫠為47kDa、87kDa、48kDa、57kDa幫6繇溉。裁蔫表達(dá)產(chǎn)耪蛋囪能與抗青海盤蜂戇簿嘲往盤清發(fā)生免疫學(xué)反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)基露HqLA-7、HqLA-9的表達(dá)產(chǎn)物縣有較好的反應(yīng)原性。這為研制青海血蜱的分予疫苗奠定了基礎(chǔ)。本磷究剩曩兔抗青海囊蜱幼蜱陽{生巍潼對(duì)己梭建茲青海斑蜱殘?bào)痚DNA表達(dá)文癢《裹金堯構(gòu)建)送

4、行免疫學(xué)篩選，煲

5、j所獲得抗原基霞在理論上對(duì)青海盤蛑幼簿幫青海矗蛑成蛑均其有保護(hù)性。關(guān)鍵詞毒海盎蜱幼辮鞠性盤渣；青海盎薄藏鱗cDNA表達(dá)文庫；表達(dá)；AbstractHaemaphysalisqinghaiensistickandtheprotozoaldiseasesthattransmittedbyitaremajoreconomicburdentoanimalhusbandryinChina．Currentlytheprincipaltickcontrolmethodistheapplicationofacaricides。Thisapproachis，howevegass

6、ociatedwithanumberofdisadvantagessuchaschemicalpollutionofthefoodchainandtheenvironmentaswellasthepotentialfordevelopmentofresistanceagainstacaricidesbyticks．Theselimitationshavenecessitatedthesearchforalternativetickcontrolmeasures。Onlyanti—tickvaccinationamongtheseveralalternativetickcontr

7、olmeasuresappearspromising．RecombinantphageswereplatedonahostBL21(DE3)pLysE，andwhenplaquesbegaintoform，theplateswereoverlaidwithnitrocellulosefiltersandincubatedforalladditional3．5hours．ThefilterswereprocessedbysuccessiveincubationswithpositiveserumofrabbitagainstHaemaphysalisqinghaiensislar

8、valtick，sheepanti—rabbitIgGalkalinephosphataseconjugate，andcolordevelopmentsubstrateshndthuspositiveplaqueswithintenseptirplecolorvcerefound．PurephagestockswereobtainedbyplaquepurificationandconvertedtoplasmidsubclonesbyplatingphageonhoststrainBM25