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《amhrⅱ、insr基因dna甲基化與pcos表觀遺傳學(xué)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文觀察相關(guān)基因是否存在表觀遺傳學(xué)的改變來(lái)解釋有關(guān)高度異質(zhì)性和家族聚集現(xiàn)象。DNA甲基化分析是常用的手段之一，從表觀遺傳學(xué)角度分析PCOS相關(guān)基因的DNA甲基化程度有望發(fā)現(xiàn)PCOS發(fā)病機(jī)制的可能原因，因而成為近年研究PCOS的熱點(diǎn)。本研究主要通過(guò)收集PCOS患者的臨床信息資料，描述其臨床上的基本特征，并通過(guò)與正常人群的比較，研究和分析各種PCOS臨床特征與AMHRII、INSR受體在卵巢、子宮內(nèi)膜局部的定位、分布及表達(dá)，以及通過(guò)對(duì)兩種受體基因DNA甲基化的關(guān)聯(lián)性，探討PCOS高度異質(zhì)性和家族聚集現(xiàn)
2、象與表觀遺傳學(xué)關(guān)系，為進(jìn)一步闡明PCOS的發(fā)病機(jī)制提供新的思路。目的1．通過(guò)收集PCOS患者基本信息和臨床資料，描述和分析其臨床基本特征。2．采用免疫組織化學(xué)方法，分析和比較AMHRII、INSR在PCOS患者卵巢和子宮內(nèi)膜的定位、分布及表達(dá)，描述AMHRII、INSR在卵巢、子宮內(nèi)膜病理變化與臨床特征的關(guān)聯(lián)性。3．通過(guò)重亞硫酸鹽處理測(cè)序法定量分析AMHRII、INSR基因DNA甲基化程度與臨床特征的關(guān)系，探討DNA甲基化與PCOS臨床特征、異質(zhì)性和家族聚集現(xiàn)象的關(guān)系，進(jìn)一步闡明PCOS與表觀遺傳學(xué)的關(guān)系。方法1
3、．PCOS患者臨床資料收集和分析隨機(jī)收集2014年03月—2014年12月在廣東省計(jì)劃生育?？漆t(yī)院門診就診及住院的95患者為研究對(duì)象，完成問(wèn)卷填寫相關(guān)信息、B超檢查和其他臨床資料。2．血液生殖相關(guān)激素測(cè)定采集患者月經(jīng)周期第2-4天血液，采用ELISA法檢測(cè)血清雌二醇(E2)、孕激素（P）、睪酮(T)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平，計(jì)算卵泡刺激素/黃體生成素(FSH/LH)比值?？崭挂葝u素（FINS）及空腹血糖（FPG）值，并計(jì)算HOMA-IR指數(shù)。3．病理組織形態(tài)學(xué)分析及鑒定取卵巢、子宮內(nèi)膜組織后
4、固定石蠟包埋，采用HE染色的方法進(jìn)行病理組織形態(tài)學(xué)觀察和分析。4．蛋白定位表達(dá)情況分析采用免疫組織化學(xué)（Immuno-Histochemistry，II萬(wàn)方數(shù)據(jù)暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文IHC）方法分別標(biāo)記AMHRII和INSR，觀察其在卵巢、子宮內(nèi)膜中的定位、分布。5．受體基因甲基化的測(cè)定與分析采用重亞硫酸鹽處理測(cè)序法定量檢測(cè)兩組血液AMHRII、INSR基因DNA甲基化程度，軟件計(jì)算甲基化率。6．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS21軟件進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)，分析AMHRII、INSR基因DNA甲基化程度與臨床特征的關(guān)系，以及闡明PC
5、OS與表觀遺傳學(xué)作用機(jī)制。結(jié)果1．PCOS患者臨床資料基本特征收集的95例PCOS患者中，臨床特征表現(xiàn)多樣化，符合PCOS臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；75例PCOS患者臨床特征中，表現(xiàn)月經(jīng)正常組18例，占24%；表現(xiàn)多囊卵巢改變54例，占72%；表現(xiàn)高雄激素或高雄激素體征共53例，占70.7%；表現(xiàn)胰島素抵抗48例，占64%。表現(xiàn)月經(jīng)正常組與稀發(fā)組兩組之間的比較，月經(jīng)稀發(fā)組年齡低，兩者比較有顯著性差異（P<0.05）。表現(xiàn)IR組與無(wú)IR兩組之間，IR組表現(xiàn)月經(jīng)稀發(fā)現(xiàn)象，兩者比較有顯著性差異（（P<0.05）。2．病理組織形態(tài)學(xué)
6、HE分析PCOS患者卵巢可見(jiàn)多個(gè)擴(kuò)張的囊泡，顆粒細(xì)胞層數(shù)減少，間質(zhì)增生，成熟黃體少見(jiàn)；正常組見(jiàn)不同發(fā)育階段的卵泡，顆粒細(xì)胞層較厚，可見(jiàn)成熟黃體。PCOS患者組子宮內(nèi)膜增厚，腺上皮細(xì)胞增生，腺體扭曲，間質(zhì)明顯增生；正常組子宮內(nèi)膜未見(jiàn)明顯增生。3．免疫組織化學(xué)分析AMHRII、INSRAMHRII、INSR在PCOS患者組及對(duì)照組的卵巢、子宮內(nèi)膜均有表達(dá)。AMHRII、的表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜，INSR表達(dá)主要定位在細(xì)胞漿，PCOS患者組INSR在卵巢顆粒細(xì)胞、卵巢間質(zhì)細(xì)胞均有表達(dá)。AMHRII在顆粒細(xì)胞中表達(dá)更明顯，
7、卵巢間質(zhì)中見(jiàn)少量分布。對(duì)照組AMHRII、INSR主要在未成熟卵泡顆粒細(xì)胞表達(dá)，間質(zhì)中見(jiàn)少量分布。PCOS患者組見(jiàn)INSR強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，整體高于對(duì)照組。AMHRII在卵巢中的表達(dá)稍高于對(duì)照組，INSR在PCOS及對(duì)照組卵巢中表達(dá)無(wú)明顯差異，AMHRII在PCOS及對(duì)照組子宮內(nèi)膜表達(dá)無(wú)明顯差異。4．重亞硫酸鹽處理測(cè)序法定量分析DNA甲基化4.1AMHR2基因DNA甲基化60例樣本AMHR2基因DNA甲基化的共檢測(cè)四個(gè)位點(diǎn)，其中PCOS組40例，正常組20例，其中P1、P2兩組間無(wú)顯著III萬(wàn)方數(shù)據(jù)暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文
8、差異；其中P3、P4兩組間有顯著差異。在40例PCOS組內(nèi)包括①月經(jīng)稀發(fā)②高雄激素血癥或高雄激素體征③一側(cè)或雙側(cè)卵巢多囊樣變?nèi)?xiàng)臨床表現(xiàn)，滿足其中兩項(xiàng)或三項(xiàng)癥狀齊全，共分四組，它們組間無(wú)相關(guān)性（P>0.05）；PCOS組內(nèi)不同臨床特征進(jìn)行AMHRII基因甲基化程度與胰島素抵抗關(guān)系有顯著差異（R=0.532，p=0.00）。4.2INSR基因DNA甲基化60例樣本INSR基
