DNA甲基化測(cè)序服務(wù)DNA甲基化是表觀(guān)遺傳學(xué)（Epigen.doc

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1、DNA甲基化測(cè)序服務(wù)DNA甲基化是表觀(guān)遺傳學(xué)（Epigenetics）的重要組成部分，在維持正常細(xì)胞功能、遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類(lèi)腫瘤發(fā)生中起著重要的作用，是目前新的研究熱點(diǎn)之一。在哺乳動(dòng)物中，甲基化一般發(fā)生在CpG的胞嘧啶5位碳原子上，通過(guò)使用5’-甲基胞嘧啶抗體富集高甲基化的DNA片段，并結(jié)合Illumina高通量測(cè)序平臺(tái)，對(duì)所有富集的DNA片段進(jìn)行高通量測(cè)序，研究人員能夠獲得全基因組范圍內(nèi)高精度的甲基化狀態(tài)，為深入的表觀(guān)遺傳調(diào)控分析提供了更有利的切入點(diǎn)。DNA甲基化測(cè)序技術(shù)優(yōu)勢(shì)?靈活度高：能夠直接對(duì)任意物種的高甲基化片段進(jìn)行測(cè)序，無(wú)需已知的基因組序列信息。?檢測(cè)范圍

2、廣：覆蓋整個(gè)基因組范圍的甲基化區(qū)域。?精確度高：能夠在實(shí)際結(jié)合位點(diǎn)50個(gè)堿基范圍內(nèi)精確定位。?數(shù)字化信號(hào)：直接對(duì)甲基化片段進(jìn)行測(cè)序和定量，不存在傳統(tǒng)芯片雜交的熒光模擬信號(hào)帶來(lái)的交叉反應(yīng)和背景噪音問(wèn)題。圖1MeDIP-Seq測(cè)序技術(shù)能夠覆蓋整個(gè)基因組區(qū)域包括啟動(dòng)子區(qū)、內(nèi)含子、外顯子、基因間，甚至是一些重復(fù)序列，并能分析這些區(qū)域各自的甲基化程度，右上角的不同顏色就代表了不同的甲基化程度（摘自DownTA.,etal,2008,NatureBiotechnology）?？党缮锾峁┑腄NA甲基化測(cè)序服務(wù)流程：1.甲基化DNA免疫共沉淀（MeDIP）2.測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建?雙鏈DNA末端

3、修復(fù)及3’末端加’A’?使用特定的測(cè)序接頭連接DNA片段兩端?高保真聚合酶擴(kuò)增構(gòu)建的測(cè)序文庫(kù)3.DNA成簇（Cluster）擴(kuò)增4.高通量測(cè)序（IlluminaGenomeAnalyzerIIx）5.數(shù)據(jù)分析?原始數(shù)據(jù)讀取?與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)并進(jìn)行注釋?確定甲基化位點(diǎn)?深層次數(shù)據(jù)分析6.提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告?原始數(shù)據(jù)報(bào)告（Fasta-Q格式），包含所有測(cè)序序列信息，堿基讀取質(zhì)量評(píng)估?基本數(shù)據(jù)分析報(bào)告（Excel表格），包含有效序列的序列信息、與參考基因組比對(duì)后的注釋信息等。?高級(jí)數(shù)據(jù)分析（應(yīng)客戶(hù)要求定制），如甲基化區(qū)域（enrichedregion）鑒定，分析兩樣本間甲基化水平有差異的區(qū)

4、域并注釋?zhuān)Y(jié)合表達(dá)譜分析其對(duì)基因的表達(dá)調(diào)控。